[发明专利]一种食品中过敏原的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食品的检测方法，特别是涉及一种对食品中可能存在的过敏原进行快速检测的方法。

背景技术

近年来，食物过敏现已成为一个公众性食品安全问题。调查显示全世界范围内有1％～2％的成年人对食品过敏，而低于三岁的儿童中有8％以上对食品过敏，发达国家过敏患者的比例更高。产生的临床症状包括皮肤反应(荨麻疹、血管性水肿、湿疹)，呼吸症状(哮喘、鼻炎)，肠胃症状(呕吐、腹泻、肠胃痉挛)，系统反应(心血管症状包括过敏性休克)等。在过去的几十年中，食品过敏的发病率和流行情况日益增加，给临床变态反应学和食品工业造成了巨大的压力。加上现在人们生活习惯的改变，食品国际贸易日益拓宽，特别是转基因食品的大量涌现，过敏症状亦趋于多样化、复杂化和严重化。因此，对食品过敏原的检测与分析就是一个极其重要的问题。

目前的研究表明，食品过敏原为分子量介于10000～70000之间的蛋白或糖蛋白，是食品中蛋白质的极小一部分，分别属于不同的蛋白家族。但是极其微量的食品过敏原蛋白即可引起严重的过敏反应，因此系统全面、精确可靠的食品过敏原检测和分析技术体系成为必需。目前过敏原的检测主要有以下几种：

1.利用抗原抗体特异性反应的原理进行检测

通常采用酶联免疫的方法。利用食品过敏原抗体和过敏原进行特异性的结合，然后酶标记的二抗与过敏原形成复合物，利用显色底物，通过颜色的深浅来判断食品中过敏原的含量。除此以外，还有双免疫扩散实验、免疫印迹实验、火箭免疫电泳实验等，都是利用抗原抗体特异性结合的原理进行检测的方法。在实验过程中，由于过敏原非特异性吸附在酶标板的底部，检测过程中出现非特异性的结合，使得检测结果出现假阳性或假阴性的结果。

2.利用表达过敏原的基因进行PCR分析

食品过敏原检测的一个新靶标就是特殊食品蛋白的cDNA。DNA分子可以通过PCR技术扩增，在PCR过程中DNA分子的引物也得到了扩增。产物即可利用分子量的大小在琼脂糖电泳上进行分离。一般来说通过引物的选择可以使具有一定同源性的DNA分子之间的交叉反应降低到最低程度，尽可能地避免假阳性结果的产生。PCR扩增技术一般用来对各种食品中经基因修饰的成份(如转基因大豆和转基因玉米)进行检测和定量分析。而直到现在，只有两种PCR方法专门针对食品过敏原(榛实和小麦)的检测。两种方法均具有很高的灵敏度，都可以达到0.001％。但是PCR的方法操作复杂，需要专门的技术人员进行检测，而且成本高，对人体和环境有一定的毒害作用。

3.组胺释放实验

组胺释放实验主要是通过食品过敏原激发致敏的靶细胞，引起细胞释放组胺，组胺含量可应用荧光测定法、放射免疫法等方法测定，与适宜参照进行比较，确定组胺释放率阳性标准，从而进行过敏原活性测定及鉴定的一类方法。通常用抗IgE抗体作阳性参照，以样品介质为阴性参照，以排除实验过程中组胺的非特异性释放，因此，必须设样品对照及非致敏靶细胞对照。有报道利用玻璃纤维包被的微量滴定板来分离组胺与干扰成分，进行食品中过敏原活性的检测。但影响组胺释放的因素比较多，需要合适的参照系统才能够进行准确检测，检测成本高，步骤复杂。

4.过敏原指纹图谱快速检测方法

质谱技术是蛋白组学中准确鉴定蛋白的关键性技术，特别是MALDI-TOF/MS(飞行质谱)常用于肽指纹图谱鉴定。在食物总蛋白双向电泳指纹图谱的基础上，对总蛋白双向电泳图谱上的单个点进行了飞行质谱分析。以飞行质谱图谱的分子量峰和图谱形状为基本参数来鉴定特征性的蛋白点。通过分析过敏原蛋白的特征，对食品中过敏原进行检测鉴定。但是需要专门的大型精密仪器，检测成本高，分析困难，需要专门的检测人员和分析人员。

综上所述，虽然目前研究的有关过敏原检测的方法很多，但都存在检测速度慢，成本居高不下的问题，而且需要特定的分析仪器进行机读，制约了食品中过敏原检测方法的发展。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种操作简便，结果准确，成本低廉，单样本或多样本可以进行自由检测的食品中过敏原的检测方法。

为了实现上述目的，本发明提供了一种食品中过敏原检测方法，该方法包括如下步骤：

a.将可拆式酶标板作为检测食品中过敏原的载体，将常见过敏原的兔源抗体固定在酶标板孔内；

b.在酶标板孔内加入食品过敏原的抽提物，使食品中可能存在的过敏原与兔源抗体特异性结合，形成结合物；