[发明专利]抗β2GPI基因工程Fab抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体，尤其是一种抗β2GPI的Fab抗体，属于生物制品领域。

技术背景

抗磷脂抗体综合征(Antiphospholipid Syndromes，APS)是一组与抗磷脂抗体(APA)有关，具有多系统多脏器损害的特点，并以动静脉血栓形成和反复自发流产为突出表现的疾病。APA是一类针对各种负电荷磷脂-蛋白复合物的自身抗体或同种抗体，包括免疫球蛋白G、M、A或几种同时存在，APA通过其识别的抗原特异性不同，与各种磷脂-蛋白复合物结合，干扰各种依赖磷脂的凝血和抗凝因子发挥作用。APS基本病理改变为血管内血栓形成，各级动静脉血管血栓可引起相应症状，胎盘小血管APS血栓可引起流产。

APS分类有以下几种：(1)根据病因的不同分为原发性与继发性APS，临床上原因不明的血栓与习惯性流产并伴APA持续阳性者，均诊断为原发性APS，继发性APS原因有自身免疫性疾病、肿瘤、感染、炎症等。自身免疫性疾病为主要原因，其中系统性红斑狼疮(SLE)最为常见。SLE患者抗β2糖蛋白-I(β2GPI)抗体阳性率高达65％。据统计，SLE患者血栓和习惯性流产的发生率分别为10％和20％～40％，若伴有LA或APA的患者发病率大大提高约为50％和96％。(2)根据抗体可分为伴LA持续阳性的狼疮抗凝因子血栓综合征(LA-T综合征)，伴抗心磷脂抗体(ACA)阳性的抗心磷脂抗体血栓综合征(ACA-T综合征)及LA与ACA同时阳性的混合性APL-T综合征。(3)据临床症状分V型：I型主要以深静脉血栓为主，包括上下肢末端静脉、肝静脉、门静脉、肾静脉血栓和肺梗塞。II型主要以动脉血栓为主，包括冠状动脉、外周动脉等。III型主要包括视网膜和脑血管血栓。IV型由以上3型混合组成。V型主要由胎盘血栓引起胎儿流产，又称胎儿流产综合征。

APS综合征的诊断标准为：(1)临床指标：①静脉血栓形成；②动脉血栓形成；③习惯性流产；④血小板减少。(2)实验室指标：①中-高滴度的IgG和IgM抗心磷脂抗体阳性；②狼疮抗凝物阳性。至少一项实验室指标加一项临床指标即可诊断。其中抗β2糖蛋白-I(β2GPI)抗体是主要的血清标志性抗体，目前作为一种实验室检测指标在其诊断方面具有很高的敏感性和特异性。

《抗β2GPI抗体与抗磷脂抗体综合征的相关性研究》来源于《中国免疫学杂志》，1999年第5期第15卷，作者：曹文华，杨翰仪。该文章通过一系列实验验证了抗β2GPI与抗磷脂抗体综合征之间的紧密关系，但是并没有由此继续做深入的剖析，通过该相关性来达到防治抗磷脂抗体综合征的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗β2GPI的Fab抗体，所述抗体具有较强的β2GPI结合活性和抗原特异性的能力。

发明人经过广泛的研究，提供了一种用抗体库技术制备针对β2GPI的基因工程Fab抗体，利用其只有单价的特点以及不具有Fc段因而不能激活补体的特性，使其封闭自身抗原表位，竞争性抑制病理性自身抗体的结合，从而阻断二聚体复合物的形成和后续的补体活化等免疫炎症过程，终止其免疫损伤从而实现APS反复自发流产的特异性预防与治疗。

β2GPI是一种血浆蛋白，它与带负电的分子(磷脂等)结合，从而抑制了由磷脂催化的凝血反应。在ELISA检测中β2GPI明显增强抗磷脂抗体与心脂结合能力，这可能是抗心脂抗体(APL)直接与β2GPI结合形成磷脂-β2GPI复合物，或者磷脂-β2GPI复合物中的磷脂暴露出了新的抗原决定簇而出现。APS主要的病理性自身抗体是抗β2GPI自身抗体，而本发明中的Fab抗体能有效抑制抗β2GPI自身抗体的结合，对该抗体活性进行的研究显示，该Fab抗体具有较强的β2GPI结合性和抗原特异性。该自身抗体通过其二价的F(ab)2’与2个β2GPI结合，形成抗体-抗原二价复合物后可以使β2GPI与膜磷脂结合的亲和力上升达100倍，这种抗β2GPI-β2GPI二价复合物与膜磷脂的高亲和力结合可以激发一系列的下游分子事件，包括1、激活补体，抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用，介导滋养层表面和血管的炎症反应；2、启动信号转导通路，诱导滋养层和内皮细胞、白细胞、血小板等细胞膜表达与粘附和血栓形成相关的表型；3、干扰破坏内皮细胞的抗凝机制。这些下游分子事件最终导致胚胎受损发生胎儿死亡或流产。