[发明专利]高密度脂蛋白测定装置及分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及分离器具、特别是分离液体中特定成分的分离器具，更详细地，涉及分离血液等体液中的高密度脂蛋白(以下，简称为HDL)部分中所含有的特定成分，特别是分离脂质成分的分离器具，以及涉及在其测定中使用的高密度脂蛋白测定装置和HDL脂蛋白分离方法。

背景技术

例如，在特开平3-99268号公报中(专利文献1)中指示出HDL脂蛋白分离方法。

血液中的HDL胆固醇是冠状动脉硬化症的危险预防因子，因此，在很多机构中，作为成人病预防检查的一环对其进行测定。

对用于评价涉及冠状动脉性心疾病的程度的危险性的参数来说，血液、血浆及血清中的全胆固醇是已知的最佳参数之一。

但是，全胆固醇的浓度是用于各个危险性评价的唯一的被限定的值。

一方面，低密度的脂蛋白(低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein)＝LDL)中的胆固醇测定比另一方面的高密度的脂蛋白(高密度脂蛋白(High DensityLipoprotein)＝HDL)中的胆固醇测定更有意义。

根据免疫学和临床学的研究，了解到在LDL胆固醇和冠状动脉性心疾病之间有正的相关性，在HDL胆固醇和冠状动脉性心疾病之间有负的相关性。

这样，由于相关性密切类似，因此，HDL和全胆固醇的测定对于危险性的评价是充分的。

该方法现在在诊断中被优选使用。

对于HDL胆固醇，将HDL脂蛋白从其他脂蛋白中分离后，利用酶法等测定上清(上清液)中的HDL胆固醇。

为了独立测定HDL胆固醇，必须分离存在的其他的脂蛋白类(LDL、VLDL、乳糜微粒)。分离方法包括基于不同的表面电荷(以纸或琼脂糖作为载体的电泳)或载脂蛋白的差异(使用特异性抗体的免疫化学方法)的方法。

此外，还有使用超离心力的方法、通过2价金属离子和聚阴离子使其他的脂蛋白沉淀来除去的方法。

由于超离心法使用超离心机，使得操作烦杂且需要很多时间，因此，现在的测定中使用的分离法的主流是沉淀法。

作为组合2价的金属离子和聚阴离子的聚阴离子沉淀剂，可以使用肝素-Ca²⁺、肝素-Mn²⁺、磷钨酸-Mg²⁺、葡聚糖硫酸-Mg²⁺。

使用这些聚阴离子沉淀剂的方法大致相同，如下所示。

即，向血清中加入上述沉淀剂，放置5～20分钟(根据使用沉淀剂的不同而不同)，充分生成沉淀后，以3000rpm的条件，离心分离10～15分钟。离心分离后，取出上清(HLD部分)，在37℃下通过胆固醇显色反应或酶电极法来定量。

专利文献1：日本特开平3-99268号公报

发明内容

但是，正如上述中所述的那样，使用沉淀剂的HDL胆固醇的测定方法，除了生成沉淀以外还需要离心分离操作，因此，虽然不如超离心法麻烦，但还是被指出操作烦杂且耗费时间的缺点。

即，即使离心分离的净需要时间是10分钟，如果加上样品的转移、分离管的准备、取得离心分离的平衡、旋转速度的上升和减速等所必须的时间，则至少需要20分钟。另外，也可能产生样品的拿错。

与上述沉淀法原理完全不同，作为实用化的方法有电泳法。该方法通过电泳分别分离HDL、LDL、VLDL，因此，是对HDL部分的胆固醇进行染色通过光密度测定法来定量的方法，但电泳和染色需要时间，即使高速化，其测定速度与沉淀法也无大差别。

鉴于上述问题，本发明的目的是提供一种分离方法，该方法不具备复杂化的附加装置，通过简单的结构，就能从生物学的液体中迅速分离非-HDL脂蛋白。

本发明的特征在于，使生物学的液体流过分离非-HDL脂蛋白的载体，从生物学的液体中分离非-HDL脂蛋白。

根据本发明可以提供一种分离方法，该方法通过简单的结构就能够从生物学的液体中迅速地分离非-HDL脂蛋白。

附图说明

图1是本发明的实施例3所涉及的图，是表示试样容器和过滤器的分离器具等的图。

图2是本发明的实施例3所涉及的图，是表示具备工作电极、参比电极的试样容器等的图。

图3是本发明的实施例3所涉及的图，是表示高密度脂蛋白测定装置的图。

图4是本发明的实施例3所涉及的图，是表示具备加压泵的试样容器和过滤器的分离器具等的图。

图5是本发明的实施例3所涉及的图，是表示具备具备注射泵的试样容器和过滤器的分离器具等的图。