[发明专利]一种生物农药生物活性测定新方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用琼脂层作为生物农药生物活性测定中植株离体部分短时间培养的营养来源和保湿材料，利用蚜虫和植株离体部分进行生物活性测定，尤其适合生物农药对蚜虫等刺吸式口器昆虫生物活性的测定。属农药生物测定领域。

背景技术

新农药的研发过程中常用农药活性测定方法有两大类：化学测定法和生物测定法。化学测定法是根据化学药品与测试样品发生的一些特殊反应，如：显色反应等，通过颜色的变化和吸光值大小的比较来评价测试样品的活性；而生物测定的方法是利用生物活体在类似自然环境条件下测试样品活性。生物测定法是农药特别是生物农药活性测定最普遍的方法。

不同的生物活性测定方法要求的测定条件各不相同，其中环境因素如温度、光照强度和湿度等是影响测定结果的主要因素。光照强度可以通过调节人工光源加以控制，温度也容易保持稳定，但利用植株离体部分进行生物活性测定时，植株离体部分短时间的培养、保鲜和实验湿度却很难控制。在生测实验中，一般采用滤纸或脱脂棉保湿的方法来保持湿度，但这些方法都存在一些问题：首先滤纸不能保证与测试用的容器完全吻合，较小的测试昆虫很容易被夹在容器和滤纸的缝隙中，造成非正常死亡；脱脂棉絮间的空隙很容易阻碍昆虫的活动：另外植株离体部分短时间培养的营养也不能保证，从而影响测定的结果。因此急需一种生物活性测定新方法来解决这些问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种生物农药等生物活性测定新方法，该方法利用桃蚜作为试虫、琼脂层作为生物活性测定中植株离体部分短时间培养的营养来源和保湿材料，解决了由于滤纸或脱脂棉等保湿方法带来的问题，提高了生物活性测试的准确性。该发明的特点在于应用生长、繁殖周期短而且易饲养的桃蚜(Myzuspersicae)作为测试材料以及应用1.6％(w/v)的琼脂层作为保湿的材料。

本发明涉及一种以桃蚜(Myzus persicae)为测试对象的生物活性测定方法。桃蚜属同翅目，蚜科。桃蚜是杂食性害虫，在我国分布很广，其寄主植物有74科285种。其中越冬寄主植物主要有梨、桃、李、梅、樱桃等蔷薇科果树等；侨居寄主作物主要有白菜、甘蓝、萝卜、芥菜、芸苔、芜菁、甜椒、辣椒、菠菜等多种作物。桃蚜是甜椒栽培的主要害虫，又是病毒的主要传播媒介。该发明发现，桃蚜生长和繁殖周期短、繁殖快，易饲养，可以作为一种非常理想的生测试虫，用于新农药的生物筛选和现有农药品种的活性测定。

本发明所述的方法包括以下步骤：

1.准备实验需要的灭菌培养皿。

2.琼脂保湿层的制备：称取适量(依实验的需要而定)琼脂置于灭菌水中，使琼脂终含量达1.6％(w/v)，加热融化，倒入灭菌的培养皿中，每个培养皿约8～10ml琼脂溶液。

3.植物叶片的准备：取一定量的待测试样品溶液，加入少量蜂蜜，由于植物叶片表面有一层蜡质层，加少许的蜂蜜(终浓度约为1％，w/v)于测定溶液和对照溶液中，使溶液更好的粘附植物叶片表面。将配制好的溶液均匀地涂在测试的植物叶片上，并用吹风机吹干。

4.实验昆虫的准备：随机挑选适量(依实验的需要而定)实验所用的桃蚜，放入一个单独的封闭容器内，使测试蚜虫饥饿12-24小时。

5.随机将1～2片处理过的叶片放在培养皿内的琼脂层上，另随机选取10只测试桃蚜置于叶片上，用封口膜封闭培养皿，防止桃蚜爬出培养皿，将培养皿放入光照培养箱中培养，培养条件：白天26℃光照14小时，夜晚18℃黑暗10小时。桃蚜活动基本稳定(约3～4小时)后，去掉封口膜。

6.从实验当日起，分别在第3天和第5天观察，记录桃蚜的死亡数、繁殖数，并做统计分析，实验结果用平均死亡率和平均繁殖数来表示。平均死亡率的计算方法为：(对照或处理的总死亡虫数/对照或处理的总试虫基数)×100％；再根据各重复的死亡率，用统计分析方法分析待测样品与桃蚜死亡率的相关性；平均繁殖数的计算方法为：对照或处理的总繁殖数/对照或处理的重复基数。再根据各重复的繁殖数，用统计分析方法分析待测样品与桃蚜繁殖数的相关性。

具体实施方式

为了更好地说明本发明，下面通过非限定性实例予以进一步说明。

实例1：

滤纸保湿和琼脂保湿在生物样品生测中的效果比较