[发明专利]创伤血清对炎性细胞NF－κB的激活作用检测及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种创伤血清对炎性细胞NF-κB的激活作用检测及其用途，用于早期判定严重创伤患者炎症反应状态。

背景技术

大量研究证实，核因子κB(nuclear factor κB，NF-κB)的活化在介导促炎细胞因子的分泌方面扮演重要角色。有学者基于对NF-κB的过度活化在脓毒症发生发展中的重要性认识，早期测定了严重脓毒症患者外周血中单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)中的NF-κB活性，发现其NF-κB活性的急剧增高与随后的死亡密切相关，表明其活性测定对严重脓毒症95患者的不良结局具有重要的预测价值。但对于严重创伤患者，PBMC中的NF-κB活性测定对其预后判定并无参考价值。Adib-Conquy等发现，严重创伤患者PBMC中的NF-κB活性于伤后1、3、5、10天降低，但该变化与创伤血清中升高的抗炎细胞因子白细胞介素10(interleukin-10，IL-10)和转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)并无明显相关性，同时发现创伤患者PBMC细胞核内的p65p50/p50p50比值降低，但在伤后感染者与未感染者之间、死亡者与存活者之间并无差异；Biberthaler等发现，严重多发伤患者外周血中的单核细胞的NF-κB活性于伤后6小时内急剧增高，但12小时后至伤后3天即减低到难以检测的水平。Stegmaier等发现严重创伤患者外周血中的多型核嗜中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil，PMN)的NF-κB活性于伤后1.5小时及6小时时相点内急剧增高，且在死亡者组增加更为明显，存活组在24小时时相点PMN的NF-κB出现第二次增高，48小时即降至难以测定水平。但PMN的NF-κB活性与新的损伤严重度积分(new injury severity score，NISS)及多器官衰竭(multiple organ failure，MOF)积分均无明显的相关性。表明严重创伤患者外周血白细胞NF-κB活性于伤后早期(6小时内)急剧升高而随后降低(即免疫麻痹状态)的变化对于创伤机体的预后判定，参考价值较小。尽管创伤后肝、肺组织白细胞中NF-κB的活化常持续更长的时间，但由于取材不便，故对其进行测定的临床指导价值不大。

业已证明，促炎细胞因子/抗炎细胞因子比值的测定较单一测定血清中促炎细胞因子(如IL-1、IL-6、IL-8、TNFα等)、抗炎细胞因子(如IL-10、sTNFR、IL-1Ra)更能客观地反应机体的炎症反应状态，并进而预测机体的器官功能的炎性损害及死亡结局。但对创伤机体的反应而言，创伤血清中内毒素、TGF-β、PGE2、儿茶酚胺、糖皮质激素、胆碱、神经肽等水平均可出现不同程度的增高，这些因子均参与介导了机体的促炎/抗炎反应过程并分别对免疫细胞的NF-κB活性产生正向/负向调节作用。因此如能综合测定严重创伤患者外周血清中上述众多因子(包括其他尚未发现的体液因子)共同对炎性细胞NF-κB活性的影响，则可更加客观地反映创伤机体的炎症反应状态，并用于预测创伤患者的不良结局。这对于指导严重创伤患者早期干预措施的实施、挽救其生命具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的是提供能够早期判定严重创伤患者炎症反应状态的方法。

本发明的另一目的是提供该方法的应用。

本发明的另一目的是提供一种试剂盒，含有pNF-κB-LUC质粒，Lipofectamine2000转染试剂，细胞培养裂解试剂，荧光素酶分析试剂。

其中所述pNF-κB-LUC质粒，Lipofectamine2000转染试剂，细胞培养裂解试剂，荧光素酶分析试剂，等均为现有技术，可以在市场上购买得到。将市场上购买到的试剂组成在一起包装，每个包装中，各试剂的量为1份到10份，

本发明还提供本发明的试剂盒在检测创伤血清对炎性细胞NF-κB的激活度数值中的应用。其中所述的炎性细胞，是指单核/巨噬细胞、多型核白细胞、淋巴细胞、内皮细胞等细胞株或上述各类细胞的原代细胞。其中所述的炎性细胞是离体培养的炎性细胞。其中的激活度数值能够判定早期严重创伤患者炎症反应状态。其中所述分析，是将正常血清组与创伤血清组对NF-κB的激活度数值进行比较。其中所述比较，是将正常血清组与创伤血清组对NF-κB的激活度数值进行比较，与正常血清组相比，创伤血清组对NF-κB的激活度数值明显增大，与正常血清组相比，MODS组、死亡组中所述增大分别较非MODS组、存活组更为明显。