[发明专利]红花桑寄生多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物多糖的提取方法，具体地说，涉及一种红花桑寄生(Scurrula parasitica L.)多糖的提取方法。

背景技术

红花桑寄生Scurrula parasitica L.是桑寄生科桑寄生亚科梨果寄生属半寄生性植物，为我国特有的植物，主要分布于我国广东、广西、云南及福建等南方地区。传统上红花桑寄生常作为桑寄生Taxillus chinensis(DC.)Danser的代用品入药，具补肝肾、祛风湿、降血压、安血养胎等功效，主治风湿、关节痛、高血压、坐骨神经痛、腰痛、产后乳少等症。

桑寄生科植物一般含大量的黄酮类成分，我们在前期的研究中发现红花桑寄生总黄酮提取物对急性髓系白血病有较好的抑瘤效果，并可增敏临床重要抗肿瘤化疗药物多柔比星的疗效，机制研究表明其可能是一种良好的NF-κB抑制剂。然而，尚未见对红花桑寄生多糖及其功用的研究。

植物多糖具有多方面的生物活性，能够调节机体免疫机能，具有抗病毒、抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老等功能，因而越来越受重视。近年来，大量的研究表明，中药多糖具有抗肿瘤作用，且毒副作用小，因而越来越成为抗肿瘤研究的热点。香菇多糖、当归多糖、猪苓多糖、云芝多糖等一批质量稳定、疗效确切、毒性和不良反应小的多糖类药物已作为抗肿瘤药物广泛用于临床。

红花桑寄生的同科植物槲寄生在国外是一种研究较多的具有抗肿瘤作用的植物，在欧洲，自1920年就对槲寄生的抗肿瘤作用开始研究，其提取物具有多种抗癌效果，对乳腺癌、胃癌与结肠癌等常见肿瘤有一定治疗作用。英国和澳大利亚已分别开发出商品名为Iscador和Isorel的槲寄生标准植物提取物用于癌症的临床治疗。已有的研究表明槲寄生提取物中的有效抗肿瘤成分可能主要是多糖、凝集素、毒肽、生物碱以及多酚类物质。

植物多糖的提取过程大多采用传统的先沉淀再去蛋白的方法。我们在研究中发现采用传统的方法来提取红花桑寄生多糖，需多次使用沉淀剂从溶液中沉淀多糖，耗费大量的溶剂，且得率低，提取出的多醣类物质水溶性很差，不利于应用。本发明采用先去蛋白再沉淀多糖的提取方法，则只需使用一次沉淀剂来沉淀多糖，节省了大量溶剂；得率高，同时提高了多糖的水溶性，便于药物研究和实际应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种先去蛋白再沉淀多糖的红花桑寄生多糖的提取方法。

为实现本发明的目的采用的技术方案是：将红花桑寄生枝叶粉碎后，用乙醇回流提取，过滤取滤渣，滤渣用热水浸提，经沉淀、干燥后得到红花桑寄生多糖提取物，其特征是经热水浸提法提取后的上清液，首先采用sevage法、TCA法或酶法，或者是他们之间的任意两种方法，或者是三种方法联用去除蛋白，再使用透析袋进行透析除去小分子成分。

采用本发明所述的红花桑寄生多糖提取方法，只需使用一次沉淀剂来沉淀多糖，节省了大量溶剂；提高了多糖的得率，同时提高了多糖的水溶性，便于药物研究和实际应用。所得到红花桑寄生多糖提取物，对小鼠肉瘤S180有较好的抑制效果，并与临床重要抗肿瘤化疗药物有显著的协同效果；该提取物也可显著延长荷肝癌腹水瘤H22小鼠的寿命。研究表明该提取物的抑瘤效果并没有剂量依赖性，而是有一最佳剂量，过高或过低的剂量均使得抑瘤效果下降。

具体的提取方法包括以下步骤：

(1)采集红花桑寄生嫩枝和叶，水洗、晾干、60℃烘干，粉碎机成粉末；

(2)取粉末，加入乙醇回流提取，以去除其中的脂溶性成分，过滤取滤渣，挥干溶剂；

(3)取挥干溶剂后的滤渣，进行热水浸泡提取，滤渣∶水＝1∶5～15，热水温度为80～95℃浸泡提取，2小时后离心或抽滤去渣；取上清液，并于60℃下减压浓缩处理；

(4)重复步骤(3)三遍；合并3次上清液。

(5)采用sevage法、TCA法、酶法或者这几种方法联用，重复三次，将上清液中的蛋白去除；

(6)去蛋白后的上清液装入透析袋进行透析，流水透析2天，蒸馏水透析1天，去除小分子成分，得到多糖溶液；

(7)在多糖溶液中加入沉淀剂，在低温下沉淀多糖，使沉淀剂在溶液中的浓度为65％～85％(v/v)，离心收集沉淀，该沉淀物经醇类、酮类和乙醚依次洗涤后冷冻干燥即得本发明所说的红花桑寄生多糖。

本发明所述的透析袋进行透析时，流水透析2天，蒸馏水透析1天；所说的透析袋的透析分子量为7000～14000D。

本发明所述的沉淀剂，是指含有1～4个碳链的醇类溶剂，最优选的是乙醇。