[发明专利]2型猪链球菌sa1KR基因敲除突变株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种2型猪链球菌salKR基因敲除突变株，其保藏号为CGMCC No.2259。

2.制备如权利要求1所述的2型猪链球菌salKR基因敲除突变株的方法，其特征在于有以下步骤：

(1)根据S.suis 2野生株05ZYH33基因组salKR编码基因的上下游DNA序列，设计PCR引物，

(2)以05ZYH33基因组DNA为模板，扩增salKR编码基因，构建基因敲除载体；

(3)建立在Spc^R基因两侧具有同源序列的salKR基因敲除载体pUC::salKR；

(4)基因敲除载体pUC::salKR电转化制备好的S.suis 2野生株05ZYH33感受态细胞；

(5)筛选具有壮观霉素抗性的猪链球菌菌落，PCR和Southern杂交证实salKR编码基因被Spc^R基因替换，即得到2型猪链球菌salKR基因敲除突变株。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：PCR引物的序列为：

LA1：5’GTGGATCCTAGCTTATTTTTACTGTTATC 3’(下划线处为引入的EcoR I酶切位点)

LA2：5’AGCTGCAGATGGAGGAAATGCGGAATC 3’(下划线处为引入的BamH I酶切位点)

RA1：5’ATGGTACCAATTACCCTTTTTACTCAT 3’(下划线处为引入的Pst I酶切位点)

RA2：5’AAGGGCCCCACCGACACTTCCACTACCTA 3’(下划线处为引入的Hind III酶切位点)

4.如权利要求1所述的2型猪链球菌salKR基因敲除突变株在猪链球菌病疫苗中的应用。