[发明专利]黄芩苷在促进骨髓间充质干细胞体外定向分化方面的用途及方法

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种中药单体化合物的用途，具体涉及黄芩苷的用途及实现该用途的方法。

背景技术

黄芩(Radix Scutellariae)为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的干燥根。苦，寒。归肺、胆、脾、大肠、小肠经。具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎功效，现代医学用于呼吸道感染，急性胆道感染，泌尿系统感染，急性细菌性痢疾，病毒性肝炎，猩红热，流脑，高血压等症的治疗。其主要有效成分为黄酮类化合物，如黄芩苷元、黄芩苷、汉黄芩素、汉黄芩苷、黄芩新素及二氢黄酮苷等。

黄芩苷(Baicalin)是从黄芩中分离提纯的天然产物，为一种单体化合物，是黄芩的有效成分之一，化学结构为：

黄芩苷具有多种药理活性：

1.黄芩苷具有阻滞钙离子通道的作用。

2.黄芩苷对超氧自由基具有明显的清除作用，可有效对抗脂质过氧化损伤。

3.黄芩苷对各种实验性肝损伤都有一定的保护作用。

4.黄芩苷具有免疫调节作用，可以增加机体的免疫力。

5.黄芩苷有抑制醛糖还原酶的作用，可用于糖尿病慢性并发症的治疗。

6.黄芩苷具有抗HIV-1的活性，是一种有效的预防和治疗HIV感染的药物。

7.黄芩苷具有心脑血管的保护作用：黄芩苷有扩张血管及降压作用，抗心律失常，抑制血管平滑肌细胞增殖，保护心肌缺血再灌注损伤，调节血脂，抗动脉粥样硬化，保护脑组织损伤。

但目前尚未见有黄芩苷用于诱导骨髓间充质干细胞体外定向分化为肝脏细胞的报道。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题提供一种黄芩苷的新用途：黄芩苷在促进骨髓间充质干细胞体外定向分化方面的用途。

所述的骨髓间充质干细胞定向分化为肝脏细胞。根据黄芩苷在诱导骨髓间充质干细胞体外定向分化的成功案例，可以用骨髓间充质干细胞作为新的筛选治疗肝脏疾病药物的细胞模型。

本发明再一个所要解决的技术问题是提供促进骨髓间充质干细胞体外定向分化为肝脏细胞的方法。为此，本发明采用的技术方案是：它采用黄芩苷作为促细胞分化剂，在成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)存在的情况下，诱导骨髓间充质干细胞定向分化为肝脏细胞。

本发明还提供了：骨髓间充质干细胞在体外用黄芩苷诱导定向分化成的肝脏细胞作为肝脏组织工程和细胞移植的种子细胞或生物人工肝的用途。用黄芩苷诱导分化的种子细胞或生物人工肝进行移植，可避免肝移植出现的免疫排斥反应及肝供体来源少的问题。

本发明还提供了：黄芩苷或黄芩苷联合骨髓间充质干细胞移植作为促细胞分化剂在制备治疗肝脏疾病药物中的用途，将黄芩苷制备成治疗肝脏疾病的药物，联合骨髓间充质干细胞移植来治疗重大肝脏疾病。

本发明还提供了：含黄芩苷的细胞保存液用于种子细胞贮存的用途。所述种子细胞可以是肝脏细胞、骨髓细胞等，用含黄芩苷的细胞保存液保存与一般细胞保存液相比，可以明显提高种子细胞的存活率和活力。

附图说明

图1为细胞甲胎蛋白(AFP)表达图：分别为诱导4、7、10、14、21天细胞AFP表达情况，其中A为单因子组，B为双因子组，C为黄芩苷组，D为阳性对照Hep G2细胞。

图2为细胞甲胎蛋白(AFP)表达半定量结果图：分别为诱导4、7、10、14、21天细胞AFP蛋白表达半定量结果，其中黑色柱为单因子组，网格柱为双因子组，白色柱C为黄芩苷组。

图3为细胞CK18表达图：分别为诱导4、7、10、14、21天细胞CK18表达情况，其中A为单因子组，B为双因子组，C为黄芩苷组，D为阳性对照Hela细胞。

图4为细胞CK18表达半定量结果图：分别为诱导4、7、10、14、21天细胞CK18蛋白表达半定量结果，其中黑色柱为单因子组，网格柱为双因子组，白色柱C为黄芩苷组。

图5为细胞谷丙转氨酶(ALT)的活性图：分别为诱导2周、3周、4周时细胞ALT的活性，其中黑色柱为单因子组，网格柱为双因子组，白色柱C为黄芩苷组，灰色条带是正常肝细胞分泌水平。

图6为细胞谷草转氨酶(AST)的活性图：分别为诱导2周、3周、4周时细胞AST的活性，其中黑色柱为单因子组，网格柱为双因子组，白色柱C为黄芩苷组，灰色条带是正常肝细胞分泌水平。

图7为细胞尿素的分泌量图：分别为诱导2周、3周、4周时细胞尿素的分泌，其中黑色柱为单因子组，网格柱为双因子组，白色柱C为黄芩苷组，灰色条带是正常肝细胞分泌水平。