[发明专利]大姚黄芩组织培养方法

说明书

技术领域

本发明属于通过组织培养技术的植物再生技术领域，主要是产自云南楚雄州大姚县的大姚黄芩的组织培养方法。

背景技术

大姚黄芩(Scutellaria.teniana Hand.Mazz)为云南省楚雄州具有地方特色的彝药，彝药名称为赊卡齐，是彝药制药工业的重要原料之一。以根入药，性寒，味苦。能消热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿温、暑温胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。现代药理实验证明其具有抗菌、解热及降压作用，近年来药理实验还证明黄芩具有明显的抗前列腺增生作用，很有可能成为理想的抗前列腺增生药。由于野生资源有限，多年来生产上通常用分株和种子进行大姚黄芩的繁殖。长期以来，在大姚黄芩种植中存在只种不选，自繁自种，导致品种退化，病虫害严重，农药使用较多，无公害得不到保证等问题。

发明内容

本发明的目的正是为了解决上述现有技术存在的不足而提供一种大姚黄芩组织培养的方法，以利用组织培养方法诱导大姚黄芩不定芽形成并再生植株，以扩大繁殖系数，利用人工方法培育脱病脱毒复壮的优良品种大姚黄芩，实现大姚黄芩的无公害生产。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

大姚黄芩组织培养方法，其特征在于，方法步骤如下：

①取大姚黄芩的茎尖为外植体，经清洗消毒后，切取茎尖顶部0.2～0.3厘米；或者取茎段为外植体，经清洗消毒后，切成0.5～1.5厘米的小茎段，每段带1-2片真叶；对茎尖或茎段进行清洗消毒，是用洗淀剂溶液浸泡5分钟，自来水冲5分钟后，用70％酒精浸泡10～30秒，5～10％次氯酸钠浸泡7～15分钟，用无菌水冲洗8～10次；

②将茎尖或小茎段接种到MS+BA 0.05～0.5mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L培养基上，暗培养一周后形成愈伤组织；

③将大姚黄芩的愈伤组织或小茎段接种到MS+BA 0.5-3.0mg/L+NAA 0.05-0.5mg/L培养基上，光照培养15-30天，形成不定芽；

④将大姚黄芩的不定芽形成的无根苗接种到1/2MS+NAA 0.5～1.0mg/L培养基中培养8～12天，至试管苗生根。

以上步骤中，所有的培养基均经121℃灭菌15～20分钟，培养时光照强度2000LX，光照时间12～14小时/天，培养温度18±2℃。

本发明研究过程中，对不同激素配比对诱导大姚黄芩的茎尖和茎段产生不定芽的影响进行了对比研究，以MS培养基为基本培养基，以6-BA、NAA激素不同配比诱导大姚黄芩的茎段产生不定芽，其结果见表1(接种30天后观察统计)。

表1.不同的激素配比及浓度对不定芽诱导的影响

根据表1的结果，培养基为MS+BA 0.5+NAA 0.5时，形成大量愈伤组织，愈伤诱导率高达100％；培养基为MS+BA 1.0～3.0mg/L+NAA 0.5mg/L时，直接形成不定芽，诱导率均为100％，以BA 3.0mg/L的培养基上的不定芽出现时间最早，增殖系数较高，但苗太弱。培养在BA浓度为1mg/L的培养基上的外植体，不定芽出现的时间稍晚3～5天，但增殖系数适中，不定芽长势最好。

本发明研究过程中，还研究了不同培养基以及不同NAA浓度对诱导大姚黄芩试管苗生根的影响。以MS和1/2MS培养基为基本培养基，用NAA的不同浓度作对比，对大姚黄芩试管苗生根培养进行试验对比，结果见表2和表3。

表2.不同基本培养基对诱导大姚黄芩试管苗生根的影响

表2的结果表明，1/2MS培养基诱导生根的效果均优于MS培养基。

表3.不同NAA的浓度对诱导大姚黄芩试管苗生根的影响

表3的结果表明，培养基为1/2MS+NAA 0.5～1.0mg/L时，试管苗10天生根，根多而且苗壮。

综上所述，以大姚黄芩的茎尖或茎段为外植体，培养基为MS+BA 0.5+NAA 0.5时愈伤组织形成，愈伤组织诱导率高达100％；培养基为MS+BA 1mg/L+NAA 0.5mg/L时，不定芽的诱导率可达100％，单株不定芽数为10～15个，不定芽长势最好；发现培养基为1/2MS+NAA 0.5～1.0mg/L时，试管苗10天左右生根，根多而且苗壮。