[发明专利]红细胞免疫功能检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，涉及一种红细胞免疫功能的检测方法，具体涉及一种红细胞C3bR花环试验及红细胞IC花环试验的检测方法。

背景技术

自1658年红细胞被发现后，一直认为其是氧气和二氧化碳的运输者。随着300多年的科技进步，人们逐渐认识到了红细胞的更多功能，其中的红细胞免疫功能是一个主要方面。

1981年，美国生殖免疫学家Siegel在前人研究成果的基础上，发现了红细胞的多种免疫功能，首先提出了红细胞是免疫细胞，而且是免疫系统的一个子系统，并提出了“红细胞免疫系统”的新概念，更新了人们对红细胞功能的认识。随着天然免疫研究的升温，1990年，Paccaud对红细胞膜补体受体进行了比较研究，发现了其簇状分布的结合位点。2004年郭峰提出“红细胞天然免疫主干道理论”，认为抗原进入血液中，首先被补体系统识别，抗原旁路激活补体黏附补体成份，然后绝大部分附有补体成份的抗原被红细胞天然免疫黏附，最终由红细胞递交给白细胞，引发白细胞产生一系列免疫反应。红细胞免疫已成为多学科研究的桥梁与工具。

红细胞数目众多，其免疫功能是其他免疫细胞所无法替代的。红细胞免疫的基础是红细胞表面具有C3b受体(C3bR)，红细胞膜上的C3bR具有免疫黏附、携带及清除循环液相中抗原异物的功能，尤其清除循环免疫复合物(CIC)是红细胞最主要的免疫功能。通过C3bR与C3b调理过的CIC结合，将其运送到肝脾等网状内皮系统加以清除，防止CIC在体内沉积，从而避免血管或组织的损伤。而这种免疫能力主要取决于红细胞膜上的C3bR数量，是衡量红细胞免疫功能状态的主要指标。

Siegel等指出，血液循环中95％的C3bR存在于红细胞表面，因此红细胞C3bR是红细胞免疫黏附作用的关键部位，并在运送和清除免疫复合物(IC)方面起着重要作用。判断红细胞免疫功能的主要指标为C3bR和IC，目前通常采用酵母菌花环试验来测定红细胞膜上C3bR和吸附的IC情况。

红细胞C3bR花环率和IC花环率可作为红细胞免疫黏附功能的指标，如二项指标都低下，判为原发性细胞免疫功能低下，为红细胞C3bR受到破坏和影响所致；如果红细胞C3bR花环率低，而IC花环率高，为继发性红细胞免疫功能低下，是由于CIC增加，红细胞黏附IC过多引起。

各国学者都在努力将红细胞免疫研究成果应用于临床诊断，Siegel的红细胞免疫黏附试验原理为当今医学研究所推崇，但其试验中采用的红细胞免疫检测试剂配制和制备繁杂，价格昂贵，试验需要一定的高档精密仪器，不易普及推广使用。中国人民解放军第二军医大学第一附属医院郭峰等人根据Siegel的红细胞免疫黏附试验原理，建立了简易的红细胞C3bR花环试验与红细胞IC花环试验(郭峰改良法)。该试验方法采用致敏和未致敏的酵母菌试剂作为红细胞免疫功能检测试剂，C3b致敏酵母菌试剂用于红细胞C3bR花环试验，未致敏酵母菌试剂用于红细胞IC花环试验。其具体试验方法是将1g活性干酵母溶于99mL蒸馏水中制成1％酵母菌悬液，经定性滤纸或纱布过滤，煮沸20min，用生理盐水洗涤2次，使在低倍显微镜下呈单个细胞分散状态，配制成1×10⁸/mL未致敏酵母菌溶液。取一部分未致敏酵母菌使用液，加入等量的补体小白鼠血清，于37℃水浴15min，生理盐水洗涤2次，配制成1×10⁸/mL致敏酵母菌溶液。将红细胞分离后配制成红细胞悬液，分别加入致敏和未致敏的酵母菌溶液，37℃水浴30min后，以戊二醛溶液固定，涂片，干燥，甲醛固定，染色，显微镜下计数，以黏附2个或以上酵母菌的红细胞为1个阳性花环，分别求出红细胞C3bR花环率和IC花环率。

郭峰改良法检测红细胞免疫黏附功能方法简单易行，检测结果可靠，成为了目前开展红细胞免疫黏附功能检测的主要方法。但是在检测试验和临床应用中发现，郭峰改良法还存在以下几点不足：1、补体失活现象严重，试剂保存期短，影响检测结果的可靠性；2、检测试剂的制备方法繁琐，原料浪费较大，制备成本大；3、检测试验的操作也比较繁琐。

CN1035215C专利提供了一种检测红细胞免疫功能的试剂及其制备方法，该专利对郭峰改良法中的检测试剂进行了改进，采用豚鼠血清或人AB型血清代替小白鼠血清作为补体血清制备致敏酵母菌使用液，并对酵母菌使用液的制备方法进行了简化。该专利与郭峰改良法比较的优势在于：豚鼠血清较小白鼠血清容易获得，补体无失活，试剂制备成本低，保存期长，检测结果容易判断，易于普及推广。

发明内容