[发明专利]抗角蛋白抗体的检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及测量体内血液特性的方法，具体是抗角蛋白抗体的检测方法及试剂盒

背景技术

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身性自身免疫性疾病。滑膜炎持久反复发作，可导致关节内软骨和骨的破坏，关节功能障碍，严重甚至会至残。血管炎病变累及全身各个器官，故本病又称为类风湿病。目前，临床上诊断RA主要依靠美国风湿病协会(ARA)1987年修订的类风湿诊断标准，内容包括：临床表现、X线改变、类风湿因子(RF)检测，而符合ARA标准的病人基本上已是RA的进展期或晚期，而早发现、早确诊及早期积极有效的治疗能在很大程度上减少骨关节受损，延缓病情的进展并改善预后，类风湿因子(RF)是ARA诊断标准中唯一的实验室指标，其敏感性较高、特异性较差，当临床症状不典型时，很难为早期诊断提供可靠的依据。

RA是我国常见的风湿病，发病率约为0.3％。在类风湿关节炎患者血清中可出现多种自身抗体，近年来发现了抗核周因子、抗角蛋白抗体等。类风湿关节炎(RA)特异的诊断标记一直是研究的热点。国内外的研究表明抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子(APF)和类风湿因子(RF)在RA具有诊断意义。IgG型抗角蛋白抗体出现于36％～60％的RA患者血清中，特异性高达95％，随着AKA检测在临床的广泛应用，发现抗角蛋白抗体阳性的“健康人”几乎均发展成典型的RA患者。

1979年Young等人发现RA患者血清中有一种能与鼠食管角质层反应的抗体，对RA具有特异性，命名为AKA。1989年Vincent等提出应将AKA更名为抗角质层抗体更为恰当。AKA可以在RA患者发病以前若干年出现，所以具有早期诊断价值。国内一些单位如北京协和医院参照此方法制作了生物薄片，进行抗角蛋白抗体的检测来诊断类风湿性疾病。目前国内临床实验室大多采用德国欧蒙公司的抗角蛋白抗体试剂盒进行检验和实验研究。

德国欧蒙公司的抗角蛋白抗体试剂盒，采用间接免疫荧光法进行检测，抗原来自大鼠食道。其方法为：将已稀释的血清样本滴加在载片的反应区内，第1次温育时，血清与反应区上生物薄片中的大鼠食道角质层反应。如果样本是阳性，特异性lgG抗体与相应抗原结合。加入抗lgG抗体荧光标记物，第2次温育时，抗lgG抗体荧光标记物、类风湿患者抗角蛋白抗体、大鼠角质层抗原相结合，然后在荧光显微镜下观察特异性的荧光模型，如果抗“类风湿关节炎角蛋白”(丝集蛋白)抗体与大鼠食道组织切片反应，将会围绕角质层细胞产生细的线状荧光。荧光模型与阳性对照基本一致。

但是采用德国欧蒙公司的抗角蛋白抗体试剂盒仅能检测到IgG型抗角蛋白抗体，而IgG型抗角蛋白抗体仅占全部抗体的85％左右，因此还有15％左右的IgA和IgM型抗角蛋白抗体患者会被漏诊，而且此种方法荧光强度弱，非特异荧光强，有可能造成漏检。

发明内容

本发明为了解决已知技术中抗角蛋白抗体试剂盒存在漏诊、漏检的缺陷，而提供一种准确性高，补体来源广泛的抗角蛋白抗体的检测方法及试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种抗角蛋白抗体检测方法，检测时向反应区内加经过稀释的血清，经孵育、漂洗、甩干，加入补体后经孵育、漂洗、  甩干，再加入抗补体抗体荧光标记物，经孵育、漂洗、去掉水滴，缓冲甘油封片，然后荧光显微镜下观察，以角质层出现典型规则的线状或板层状荧光为阳性。

所述的补体、抗补体抗体均来自哺乳动物，也可以采用人重组基因方法制作的补体。

所述的抗补体抗体为抗C₃c抗体

本发明检测抗角蛋白抗体的试剂盒，为六面体形状，由盒盖与盒底组成，在盒底内靠近长边的任意一条边设置有放置试剂瓶的瓶架；瓶架上设有多个放置试剂瓶的孔；盒底的中间设有一个将盒底分成放置试剂与放置载片两部分的挡片。

上述试剂包括阴性对照血清、阳性对照血清、浓缩磷酸缓冲液、补体和抗补体抗体荧光标记物的应用液，其中补体为粉状。

所述载片上形成有三个以上的反应区，每个反应区包被一个大鼠食管制作的生物薄片作为抗原。

本发明采用在生物薄片上加入血清、补体与标记荧光素的抗补体抗体，可显著提高检测效果。