[发明专利]生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用寇氏隐甲藻[Crypthecodinium cohnii(Seligo)Javornicky]生产二十二碳六烯酸(DHA)油脂技术领域，具体地说是一种生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生产方法。 

背景技术

近年来，多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acids，PUFAs)对人类健康的重要作用已愈来愈受到人们的重视。其中，二十二碳六烯酸因其在人体和动物体内的重要生理功能而倍受人们的青睐。研究表明，DHA是人体某些组织中细胞膜的基本组分；对婴幼儿视觉系统和神经系统的发育起着重要作用；还具有降低胆固醇作用，抗凝血功效以及抑制癌功效，防止老年性痴呆症等，并且它是幼鱼生长所必需的一种脂肪酸。利用寇氏隐甲藻生产二十二碳六烯酸(DHA)油脂已形成工业化生产，二十二碳六烯酸的生产工艺在不断改进。其中现在公开报道海洋微藻生产二十二碳六烯酸(DHA)油脂中藻细胞破壁方法有两类。一类是物理方法破壁：机械破壁如采用均质机或胶体磨等机械进行磨檫和挤压使细胞壁破裂、干燥法等。采用机械破壁方法细胞破壁不完全，用有机溶剂萃取收得率为总油60-70％。采用干燥法耗时耗能，且加热及通气方法干燥后提取油脂过氧化值较高，毛油品质较差，冷冻干燥成本较高，干燥后用有机溶剂萃取精炼后得率仅为毛油30-50％。公开日为1995年4月5日、公开号为CN1101034A的专利申请公开的利用海洋微藻生产二十二碳六烯酸(DHA)油脂的方法是采用冷冻干燥或加热及通气方法干燥后进行提取。另一类是化学方法破壁；采用化学试剂破坏细胞壁结构，然后用有机溶剂萃取得到毛油。公开日为2007年6月27日，公开号为CN1986822A的专利申请公开的用寇氏隐甲藻发酵生产二十二碳六烯酸油脂的方法是采用加破壁剂如十二烷基硫酸钠等，其用量为浓缩发酵液重量的0.1-0.6％。这种方法得到油脂中会有化学试剂残留，影响油的品质。且毛油质量较差，精炼后得率仅为毛油30-50％。

发明内容

本发明的目的是研制一种将酶法破壁用于寇氏隐甲藻[Crypthecodinium cohnii(Seligo)Javornicky]发酵生产二十二碳六烯酸油脂的方法，它大大地提高了二十二碳六烯酸(简称DHA)的收得率和毛油的品质。 

本发明生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生产方法，包括：以寇氏隐甲藻[Crypthecodinium cohnii(Seligo)Javornicky]为出发菌株，在液体培养基中连续培养寇氏隐甲藻得到海藻细胞，然后通过生物酶法破壁从海藻细胞中提取二十二碳六烯酸油脂。 

本发明所用的寇氏隐甲藻菌种名称是Crypthecodinium cohnii(Seligo)Javornicky。可以从包括ATCC(美国典型培养物收集中心)的保藏培养机构获得。 

生物酶分为主体酶和辅助酶； 

主体酶为碱性蛋白酶(2709)、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶，可以使用其中的一种或几种，若为几种，其比例可按任意比例配合使用。其用量为发酵液重量的0.12-0.5％，若为浓缩发酵液，其用量按浓缩前发酵液重量计算； 

辅助酶为胰蛋白酶、靡蛋白酶，纤维素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶，可以使用其中的一种或多种，若为多种，其比例可按任意比例配合使用。其用量为发酵液重量的0-0.025％，若为浓缩发酵液，主体酶和辅助酶用量按浓缩前发酵液重量计算； 

在使用时，单独用主体酶或主体酶和辅助酶并用都可达到破壁。 

本发明生物酶法破壁用于二十二碳六烯酸油脂生产方法：在发酵液或过滤浓缩发酵液中加入主体酶，用量为发酵液重量的0.12-0.5％若为浓缩发酵液，其用量按浓缩前发酵液重量计算；辅助酶，用量为发酵液重量的0-0.025％，若为浓缩发酵液，主体酶和辅助酶用量按 浓缩前发酵液重量计算，升温50-70℃，保温搅拌3-9小时，加入95％的乙醇，乙醇用量为发酵液浓缩发酵液的30％-150％，加入有机溶剂量为发酵液或浓缩发酵液重量的1.5-4.5倍，进行萃取得到二十二碳六烯酸毛油。将二十二碳六烯酸毛油经水化、碱炼、脱色、脱臭后得到二十二碳六烯酸精炼油。 

其中所述的有机溶剂为正己烷或氯仿等。 

本发明所述的浓缩发酵液中主体酶和辅助酶的加入量，是以过滤浓缩发酵液前的发酵液量来计算的。