[发明专利]一种快速检测蔬菜综合毒性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测蔬菜综合毒性的方法，属于食品安全检测技术领域。

背景技术

“民以食为天，食以安为先”。当前，蔬菜时常受农药、重金属和未知毒物的污染，因此，蔬菜食用安全性问题尤为引人关注。

通过互联网搜索，与“食用蔬菜农药中毒”有关的信息有近97万多项。由于中国农业的特殊性，蔬菜生产与流通的安全性控制问题呈现基础薄弱，面大点多的特点。

目前，安全控制监测方法的关键技术，以气相、液相色谱以及分光光度计仪器分析为主，可检出样品中的痕量污染物，但是存在着操作复杂、时间长、成本较高等问题，不适于蔬菜生产和流通过程中的现场监测，也无法对污染物质进行生物危害性评估。

一些具有遗传毒性的污染物质逐渐被人们认识；同时，对由多个污染因子引起的食物综合生物毒性也引起了人们的关注。还有类似“苏丹红一号”食品安全危机的出现，对现有蔬菜食用安全监测手段提出挑战，当前只检测蔬菜中已知有毒有害物质，而对未知有毒有害物质就无能为力，尤其对于由多种有毒有害物质共存时产生的综合生物毒性缺乏有效的快速检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测蔬菜综合毒性的发光细菌检测法，本方法用于蔬菜生产和流通过程中进行安全性快速检测，从样品取样处理直到检测结果出来，不超过1小时。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：采用发光细菌检测法，来判定所测样品是否含有毒性物质及其综合毒性的程度，给出可否安全食用的结论。所述的发光细菌检测法，包括如下步骤：1)发光细菌的准备，2制备测试用菌液，3)选取蔬菜样品，4)进行发光检测，5)发光强度的计算，6)蔬菜食用安全性结果评价。经过发光细菌的准备和样品的预处理，随后进行发光检测，由此判断样品是否存在生物毒性。

采用发光细菌检测法，适用于蔬菜上市之前的安全性检测，对所检样品做出生物毒性的综合判断(有毒、无毒或者可疑等)。

以下对如下步骤进行说明：

1)发光细菌的准备，发光细菌菌种采用青海弧菌Q67菌株(Vibrioqinghaiensis Q67)，其培养基成分，包括MgSO₄ 2.47g，MgCO₃0.79g，MgBr₂ 0.09g，MgCl₂ 0.109g，CaCO₃ 0.103g，KCl 0.122g，NaCl8.29g，Mg(HCO₃)₂ 0.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，于121℃灭菌20min，制成斜面，贮于4℃冰箱备用。

2)用上述青海弧菌Q67菌株的斜面菌种，移接到新鲜斜面上，20-22℃培养12-14h，此时细菌发光明亮，用10ml生理盐水(0.85％Nacl溶液)将菌苔从斜面上轻柔冲刷下来，摇匀，用少量生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660≈0.3左右，取0.1ml菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测发光。

3)蔬菜样品的准备：取有代表性蔬菜样品50g，叶菜类蔬菜取叶片部位，瓜果类蔬菜用削皮刀取表皮部位，操作者需戴无菌手套，用50ml无菌生理盐水浸泡15min，用旋涡震荡器震荡1min，，取上清液备用，对照选用同类无污染蔬菜50g，用上述样品处理方法同样处理备用。

4)发光检测。准备好三个测试杯，每个小杯各平行样，对照也取三个测量杯，各加入2ml上清夜同样设置三个平行样。依次加入0.2ml测试用菌液每个测量杯加菌液的时间间隔为15s，放置30min后，发光检测仪依次相隔15s测定各测量杯的发光强度，计算相对发光强度。

5)发光强度的计算：

6)蔬菜食用安全性结果评价