[发明专利]筛选加强型抗肿瘤化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医药领域，具体地，本发明涉及利用双通道筛选加强 型抗肿瘤化合物的方法。

背景技术

肿瘤疾病现已上升为世界头号″杀手″，严重威胁人类的生存和健康。目前，对 于癌症的治疗仍以化疗及放疗为首选，两者虽对肿瘤的治疗取得了相当的疗效，但 由于缺乏对肿瘤细胞的特异性因而具有较大的毒副作用以及某些肿瘤细胞对化疗和 放疗处理的不敏感，因此在很大程度上限制了它们在临床中的应用。高通量筛选、 分子模拟、药物设计方法和各种生物技术在抗肿瘤药物研究中的应用，大大加快了 药物研究工作的速度。采用这些新技术，Novartis的科学家在20世纪80年代后期，以 融合基因Bcr-Abl的表达产物——酪氨酸激酶为靶标，开发了对慢性骨髓白血病有较 好疗效的新药Gleevec(STI571)[Buchdunger E，Zimmermann J，Mett H，et al.Inhibition of the abl protein-tyrosine kinase in vitro and in vivo by a 2-phenylaminopyrimidine derivative.Cancer Res，1996，56：100～104]。

然而，新药研究领域目前仍面临许多严峻的挑战，寻找治疗多基因疾病(如肿瘤、 神经退行性疾病、代谢性疾病等)和抗病毒感染(如艾滋病、肝炎等)的有效药物至今 仍很困难。一个重要原因是基因的功能及其调控远比人们起初设想的要复杂得多。 大多数疾病是由多种基因共同影响的结果；人体内存在着基因网络复杂的动态调控 机制。因此，针对单个分子靶点的新药研究思路和高通量筛选技术，难以全面、完 整地反映化合物与疾病的相关性。

现在用于临床的抗肿瘤药物普遍存在选择性差、毒副作用大、易产生耐药性等 问题，因此继续寻找选择性高、毒副作用小的抗癌药是抗肿瘤新药研究的重点.。抗肿 瘤药物筛选是整个抗肿瘤药物研究过程中非常重要的一环，建立一种针对多靶点， 提高选择性，克服耐药性和新的作用机理的高度自动化的高通量筛选方法是当务之 急。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用双通道筛选加强型抗肿瘤化合物的方法。

本发明先以Aurora B激酶为靶点，建立了高通量筛选模型筛选其小分子抑制 剂，再将筛选出的小分子化合物进行体外激酶抑制选择性实验，发现它对VEGFR激酶 活性也有明显的抑制作用.将二次筛选得到的化合物进行细胞水平上和动物体内实 验，发现该化合物不仅能抑制肿瘤细胞增殖，阻滞肿瘤细胞有丝分裂，而且抑制肿瘤新 生血管生成，从而抑制肿瘤的生长和转移。

AIK(Aurora/Ipl1 Kinase)是目前已知的五大调节性激酶家族之一。到目前为 止，人类Aiks家族共发现三个成员：Aik1、Aik2(Aurora-B)和Aik3。其中，Aik2 主要在细胞有丝分裂期起作用。它作为染色体伴随蛋白参与调节着丝粒与纺锤体微 管的相互作用，在中期至后期这一瞬时，Aik2由着丝粒迁移至细胞中间区带[Bischoff， J.R.，Anderson，L.，et al.(1998)EMBO J.17，3052-3065]，末期分布于细胞盘和后有丝 分裂桥，参与后有丝分裂事件，故与染色体的分离和胞质分裂有关。Aik2的突变使 分裂沟的形成被抑制，并导致形成多核细胞。

VEGFR有3种即VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2(KDR/Flk-1)、VEGFR-3 (Flt-4).VEGFR是一类酪氨酸激酶跨膜糖蛋白，它由7个类Ig结构域组成的胞外区， 一个跨膜结构区和胞质内酪氨酸激酶结构区组成。VEGFR的胞外段是与VEGF结合 的区域，两者结合后VEGFR构象发生变化，导致受体二聚化，其胞内段酪氨酸位点发生 自磷酸化，激活下游的信号传导通路。VEGF刺激内皮细胞的增殖、增加血管的通透 性和新血管的生成作用主要是通过结合和激活VEGFR-2来实现的。

本发明提供了一种利用双通道筛选加强型抗肿瘤化合物的方法。该方法依次包 括以下步骤：

(1)先通过计算机模拟方法筛选aurora-B激酶抑制剂；

(2)在所得aurora-B激酶抑制剂中用计算机模拟方法筛选VEGFR激酶的抑制 剂。

本发明的方法还可以按照第二种方法进行：

(1)采用放射性同位素技术筛选aurora-B激酶抑制物；