[发明专利]尿视黄醇结合蛋白胶体金快速检测试纸

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药和免疫检测领域。更具体而言，本发明涉及用于检测尿视黄醇结合蛋白(RBP)的胶体金快速检测试纸。

背景技术

视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Proteins，RBPs)是一类在人体内负责从肝脏转运视黄醇至各靶细胞的运载蛋白，对视黄醇生理功能的发挥起着重要作用。目前已发现七种不同的RBP亚型，主要分布于血液循环系统(RBP4，简称RBP)、细胞(RBP1、RBP2、RBP5、RBP6、RBP7，简称CRBPs)和视网膜光感受器间(RBP3，简称IRBP)。

RBP与全反式视黄醇结合[郭晓红，储明星，周忠孝，视黄醇结合蛋白及其基因的分子生物学，遗传，26(2)，257-262，2004]，主要在肝脏中合成。除了肝脏，在肾脏、大脑、胰腺和心脏等器官中也能合成RBP。不论其最终被转化成视黄酸、视黄醛还是维生素A，视黄醇均以全反式视黄醇的形式与RBP结合[Helen M.Naylor和Marcia E.Newcomer，The structure of human retinol-bindingprotein with its carrier protein transthyretin reveals an interaction with the carboxyterminus of RBP，“人视黄醇结合蛋白与其载体蛋白转甲状腺素蛋白的结构揭示了与RBP的C末端的相互作用”Biochemistry，38，2647-2653，1999]。

肝脏分泌的RBP-视黄醇与转甲状腺素蛋白(Transthyretin，TTR)形成稳定的蛋白复合物在血液系统中循环。RBP-视黄醇-TTR复合体的形成有助于防止小分子量的RBP在肾脏中的损失，同时还可能降低RBP4在血液循环中对胞间组织的渗入[Marcia E.Newcomer和David E.Ong，Plasma retinol binding protein：structure and fucntion of the prototypic lipocalin，“血浆视黄醇结合蛋白：prototypic lipocalin的结构和功能”，Biochimica et Biophysica Acta，1482，57-64，2000]。RBP-视黄醇-TTR复合体进入血液系统之后，随着血流进入身体各组织，与靶细胞细胞膜上的RBP受体结合。此时，该复合体携带的视黄醇被释放，并转运到细胞内与CRBP结合，随后在辅酶II介导的脱氢酶和细胞视黄醛脱氢酶的作用下转变为视黄酸，从而调控多种基因的表达。RBP-视黄醇-TTR复合体在视黄醇释放后解体，RBP以游离的形式存在于血液系统中，游离的RBP在肾近曲小管被重新吸收和分解。因此，正常人尿液内几乎不含RBP，其含量很低。研究表明，人体液中RBP的含量与一些疾病关系密切。当肾小管损伤时，尿液中RBP含量会有不同程度的上调。[杨顺江，视黄醇结合蛋白的测定及其临床意义，国外医学临床生物化学与检验学分册，11(5)，16-19，1990]。

正常人尿液中RBP4含量甚微，一般小于0.1mg/24小时尿，但肾小管病人尿液中含量一般大于1mg/24小时尿。因此，尿液中RBP的含量可作为诊断肾小管损伤的指标。利用RBP的特异性和在病人体内的一定浓度，可以通过检测尿RBP蛋白含量来对肾小管疾病病人进行诊断。

目前，临床上用于肾功能损伤早期诊断的尿小分子蛋白有β2微球蛋白和RBP。β2微球蛋白在pH＜5.5时很不稳定，易降解，取尿液标本后应立即调pH至中性。而且，β2微球蛋白在尿液中的半衰期较短：pH4.0，4℃放置4小时后有70％的降解，而RBP在相同条件下仅有降解5％。因此，RBP相对于β2微球蛋白在肾功能损伤诊断中更稳定，更可靠。

然而，常规检测技术通常都只用于检测血中RBP，而不用于检测尿中的RBP。这是因为尿液成分复杂，肾脏疾病病人尿样一般为蛋白尿，尿样中含有大量蛋白质，对检测目的蛋白RBP产生一定干扰。

目前，用于检测尿中RBP的方法为ELISA法，但ELISA试剂盒检测也会因尿中其它成分的影响而出现一定的假阳性结果，并且该试剂盒需保存在低温下，保质期也仅为半年。尿RBP的检测局限于实验室诊断，需要依赖配套仪器读取数据，成本相应较高，检测时间长，取样量大，需要专门的技术人员读取分析数据。

因此，本领域迫切需要一种能够更加快速、简易、灵敏地检测尿视黄醇的检测方法和检测试剂。

发明内容