[发明专利]基于量子点标记的免疫印迹检测方法

权利要求书

1、一种基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征在于，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，探针是抗体，显色用量子点标记的二抗，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与量子点标记的第二抗体起反应，在紫外灯下，量子点发射荧光以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分，用简单紫外成像系统配备滤光片得到免疫印迹图像。

2、根据权利要求1所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，包括以下步骤：

第一步.量子点与抗体的连接

将表面带有羧基的量子点分散在硼酸盐缓冲溶液中，加入硫化二亚胺和二抗，漩涡混合振荡均匀，在室温下反应，反应溶液离心，用磷酸缓冲溶液多次洗涤，得到量子点和二抗连接物，即量子点标记的二抗；

第二步.免疫印迹过程

电转移：将电泳后的胶平铺在经甲醇浸泡后的聚偏二氟乙烯膜上，夹在六层滤纸中间，放到半干式电转仪上，恒流转膜；

免疫反应：将转好的膜放到TBST溶液中清洗，加入含5％脱脂奶粉的TBST溶液中，摇床封闭，之后加入1∶1000稀释的单抗，摇床孵育，TBST溶液清洗两次，加入1∶500稀释的量子点标记的二抗，在避光条件下孵育，TBST清洗三次；

拍照：直接将反应后的膜在凝胶成像系统中成像，利用量子点在紫外光照射下发射荧光的性能，得到免疫印迹图像。

3、根据权利要求1或者2所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，所选用的量子点，其发射波长是520nm、560nm、600nm和620nm中的一种。

4、根据权利要求2所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，第一步中，在室温下反应时间为3小时。

5、根据权利要求2或4所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，第一步中，所述硼酸盐缓冲溶液，其pH＝9.18；所述磷酸缓冲溶液，其浓度为0.1M，pH＝7.8。

6、根据权利要求2或4所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，第一步中，所述恒流转膜，是指60mA恒流转膜2小时。

7、根据权利要求2所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，第二步中，将转好的膜放到TBST溶液中清洗，其时间为10min。

8、根据权利要求2或7所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，第二步中，摇床封闭是指37℃摇床封闭1小时。

9、根据权利要求2或7所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，第二步中，TBST溶液清洗两次，每次5分钟。

10、根据权利要求2或7所述的基于量子点标记的免疫印迹检测方法，其特征是，第二步中，在避光条件下37℃孵育60分钟，TBST清洗3次，每次5分钟。