[发明专利]抗柑橘溃疡病pthA－nls基因及其构建方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗柑橘溃疡病基因及其构建方法，尤其是涉及一种利用柑橘溃疡病的致病基因pthA构建的抗柑橘溃疡病基因及其构建方法。

背景技术

柑橘溃疡病(citrus bacterial canker disease)是由地毯黄单孢杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.citri)引起的一种细菌性病害。对柑橘苗木、产量及果品品质影响极大，严重危害着柑橘产业的健康发展。到目前为止，还没有能根除柑橘溃疡病菌的特效方法，柑橘品种资源中亦未发现完全抗病的品种，柑橘抗溃疡病育种多年，没有取得实质性进展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗柑橘溃疡病基因及其构建方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

研究表明，病原基因pthA是柑橘溃疡病亚洲型(A型)致病所必需的因子，pthA表现出致病性和无毒性双重功能，即在非寄主上引起超敏反应，在寄主上引起溃疡状症状。

本发明者利用柑橘溃疡病的致病基因pthA介导广谱抗性原理，构建了抗柑橘溃疡病的新基因pthA-nls，所述抗柑橘溃疡病基因pthA-nls具有本说明书第5-10页记载的序列表所示的序列。

其构建方法包括以下步骤：(1)引物设计，根据基因银行登记序列号为U28802的pthA基因序列设计溃疡病核定位信号的特异性引物：

            引物名称   序列                                     引入酶切位点

上游引物    p1         5′-gactctagagttgcccagttatctcgccctga-    Xba I

                       3′

            p2         5′-gaggatccgttgcccagttatctcgccctga-3    BamHI

                       ′

下游引物    p3         5′-gcctcgagcaaccatgcgagctcctcttcgttg    Sac I

                       a-3′

            p4         5′-cccggggcctcgagcaaccatgcgagctcctct    Sma I

            tcgt-3′