[发明专利]抗呼吸道合胞病毒F蛋白和G蛋白的免疫球蛋白制备方法

说明书

一、技术领域

本发明属于病毒学和免疫学领域，涉及一种药物制备方法，特别涉及一种用于预防和治疗的呼吸道合胞病毒中和抗体的制备方法。更具体地说，本发明涉及通过免疫动物或人的能够产生呼吸道合胞病毒特异性免疫球蛋白的抗原物质的来源、呼吸道合胞病毒特异性免疫血浆或体液的筛选方法以及呼吸道合胞病毒特异性免疫球蛋白的分离提纯等的制备方法。

二、背景技术

呼吸合胞病毒(Respiratory virus RSV)是世界范围内婴幼儿病毒性下呼吸道感染的最重要的病毒病原，RSV是1956年首次从患普通感冒症状年幼黑猩猩的鼻洗液中分离的，后也从患呼吸道感染的婴儿中分离到同样的病毒，因该病毒可致培养细胞产生独特的细胞融合作用，故命名为呼吸道合胞病毒。此后证明RSV是引起婴幼儿下呼吸道感染主要的和常见的 病原，在绝大部分地区RSV所致的1岁以内婴幼儿肺炎和支气管炎，远远高于其他病原微生物。近年来又发现RSV感染是免疫抑制成人和老年人的重要病原。

呼吸道合胞病毒(RSV)属副黏病毒科、肺炎病毒属。肺炎病毒属包括：鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice，PVM)、火鸡鼻气管炎病毒(Turkey rhinotracheitis virus，TRT)以及人类、牛和羊呼吸道合胞病毒(human RSV，HRSV；bovine RSV，BRSV；ovineRSV，ORSV，caprine RSV，CRSV)。呼吸道合胞病毒为单链负链RNA病毒，即病毒的核酸为非节段性的负链RNA，并具有以下特征：(1)病毒基因为非节段性的负链RNA；(2)在病毒颗粒或感染细胞内整个基因同病毒蛋白结合，形成核衣壳；(3)在病毒颗粒内有病毒编码的、同核衣壳连接的多聚酶；(4)病毒基因组RNA绝大部分被转录为非重叠性的亚基因组信使RNA，即mRNA；(5)病毒的复制在胞浆内进行；(6)核衣壳以出芽的方式通过胞膜，而形成具有脂质胞膜的子代病毒，其脂质胞膜上有病毒编码的跨膜蛋白。位于病毒颗粒表面的跨膜蛋白形成在电镜所见的间距为6～10nm、长约11～20nm的“刺突”状结构。因此RSV毒粒是由脂质胞膜包裹的核衣壳组成，并具有一个特殊的结构蛋白M2，且RSV的毒粒极不稳定。组织培养中的RSV具有形态和大小的多形性，既有直径为80～350nm的球形颗粒，又有直径为60～100nm，长达10μm的丝状病毒。虽然RSV的形态差异性很大，但绝大多数的感染性颗粒只含有一个功能性的病毒基因组RNA。

RSV基因是一个由15191个核苷酸组成的负链RNA，主要编码10个蛋白质如下：

(1)、N蛋白，是核衣壳相关蛋白，1203个核苷酸，蛋白质长度为391个氨基酸，分子量为43423Da，功能是同病毒基因组RNA复制中间体RNA紧密结合；

(2)、P蛋白，也是核衣壳相关蛋白，914个核苷酸，蛋白质长度为241个氨基酸，分子量为27150Da，功能是病毒的磷蛋白，酸性，由于其残基带电，电泳迁移率不规则；

(3)、L蛋白，也是核衣壳相关蛋白，6578个核苷酸，蛋白质长度为2165个氨基酸，分子量为250226Da，功能是病毒多聚酶亚单位，含有高度保守的功能区；

(4)、F蛋白，是跨膜表面蛋白，1903个核苷酸，蛋白质长度为574个氨基酸，分子量为63453Da，功能是主要的病毒保护性抗原，介导病毒的穿入、融合的形成；

(5)、G蛋白，是跨膜表面蛋白，923个核苷酸，蛋白质长度为298个氨基酸，分子量为32587Da，功能是主要的病毒保护性抗原，介导病毒的吸附，起始于第2个可读框的编码蛋白为分泌形式，不同亚型间差异显著；

(6)、SH蛋白(或1A)，是跨膜蛋白蛋白，410个核苷酸，蛋白质长度为64个氨基酸，分子量为7536Da，功能是不祥；

(7)、M蛋白，是基质蛋白，958个核苷酸，蛋白质长度为256个氨基酸，分子量为28717Da，功能是典型副黏病毒基质蛋白，可能介导核衣壳同包膜的连接；

(8)、M2蛋白(或22k)，也是基质蛋白，961个核苷酸，蛋白质长度为194个氨基酸，分子量为22153Da，肺炎病毒特有的，功能不祥，基因内有第2个可读框；

(9)、NS1蛋白(或1C)，是非结构蛋白，532个核苷酸，蛋白质长度为139个氨基酸，分子量为15567Da，肺炎病毒特有的，功能不祥，偏酸性；

(10)、NS2蛋白(或1B)，是非结构蛋白，503个核苷酸，蛋白质长度为124个氨基酸，分子量为14674Da，肺炎病毒特有的，功能不祥，偏碱性。