[发明专利]一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物的培育方法。

背景技术

目前，葡萄糖酸钠的制备工艺是利用青酶或曲霉，采用通气搅拌深层发酵技术，发酵时间48-60小时，转化率为90％。该方法的缺点是发酵周期比较长，转化率不高。

发明内容

本发明的任务在于提供一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法，采用此方法培育出的菌株具有糖酸转化率高和产酸周期短等优点。

其技术解决方案是：

一种高产葡萄糖酸钠菌株的培育方法，以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为100-120％的大罐中分离得来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后，取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象，经10-10⁹倍数的稀释梯度，分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟，然后进行菌种平板涂布，于40℃、40％的相对湿度下恒温培养6-10h，待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射1-3分钟，迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40％的相对湿度下恒温培养3-4天，待长出的菌落中心有黑色孢子长出时，选取变色透明圈较大的菌落，将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上，在35-40℃、相对湿度40％的条件下，避光恒温培养5-6天，得到成熟饱满的斜面孢子。

将上述培养好的斜面孢子，选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选：在温度40℃，转速200r/min，湿度70-80％的相同条件下，进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选，每次筛选分别淘汰50％-60％，最终选出高转化率的葡萄糖酸钠的菌种。

本发明的有益效果是：本发明所述的菌株在高峰期降糖速率达到2.5％/h，发酵罐生产中转化率达到117％以上，发酵周期14h以内，提取率95％以上，提高了初糖浓度，缩短了发酵周期，降低了残糖，降低了生产成本。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面结合实施例来更加详细的描述本发明。然而这些实施例只是起到说明的作用，本发明并不局限于这些实施例。

实施例1：以葡萄糖酸钠生产中来自于发酵转化率为100％的大罐中分离得来的菌株为出发菌株，经活化培养基培养后，取其生长正常、菌丝健壮、孢子丰满的斜面作为分离纯化的对象，经10-10⁹倍数的稀释梯度，分别在60℃、70℃和80℃的温度下保温处理5分钟，然后进行菌种平板涂布，于40℃、40％的相对湿度下恒温培养6小时，待孢子萌芽时经40W紫外灯30cm距离垂直照射1分钟，迅速以黑色牛皮纸包扎单板移入恒温培养箱于40℃、40％的相对湿度下恒温培养3天，待长出的菌落中心有黑色孢子长出时，选取变色透明圈较大的菌落，将其孢子挑到专用孢子生长培养基斜面上，在35℃、相对湿度40％的条件下，避光恒温培养5天，得到成熟饱满的斜面孢子。

将上述培养好的斜面孢子，选取生长旺盛、饱满的斜面进行摇床筛选：在温度40℃，转速200r/min，湿度70％的相同条件下，进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选，每次筛选分别淘汰50％，最终选出高转化率的葡萄糖酸钠的菌种。

经测试，在500L小试自动罐上采用38％的糖浓度，无机盐MgSO₄·7H₂O含量为0.25％，KH₂PO₄含量为0.18％，(NH₄)₂HPO₄含量为0.14％，FeSO₄·7H₂O含量为0.1％，NH₄NO₃含量为0.1％，尿素含量为0.1％的发酵培养基中，控制发酵温度35℃，溶解氧10％，压力1Mpa，PH值6.0，葡萄糖酸钠菌种的发酵周期缩短为14小时，初糖提高到38％，且残糖降低为0.4％，产品转化率达到117％，并且从根本上改变了以往的随周期加长，钠离子浓度加大而降糖变缓的情况，不受钠离子浓度的影响，在工艺操作稳定的情况下保持降糖高峰直至结束。