[发明专利]一种病毒血凝抑制试验工作液的生产方法及其应用装置

说明书

技术领域：

本发明属农业领域兽医专业，特别涉及含血凝素(HA)的动物病毒抗体监测用的血凝抑制试验工作液的生产方法及其应用装置的改进。

背景技术：

含血凝素的动物病毒如鸡新城疫、禽流感、鸡产蛋下降综合症都是严重危害养殖业发展的病毒性传染病。通过免疫监测确定最佳免疫时机，适时免疫接种是当前控制这几种重大传染病发生的最好方法。血凝抑制(HI)试验是目前国际动物卫生组织(OIE)推荐的进行鸡新城疫和禽流感等抗体检测的金标准，也是中华人民共和国国家标准规定的含血凝素病毒的抗体检测标准。但是，这种HI试验需要用SPF(无特定病原)或不免疫公鸡血制备1％鸡红细胞悬液(指示剂)。SPF鸡的饲养需要有专门的SPF鸡舍和严格的饲养条件；不免疫鸡的饲养也存在着发生疫病的风险，且禽流感等疫病不免疫需经省级兽医行政主管部门批准；采血时需要用阿氏(Alsevers)液(主要成份为抗凝剂)，需要离心红细胞配制1％红细胞悬液。洗涤用PBS或生理盐水，需要10ml×6转子和1.5×24(或12)转子的小型离心机各一台；需要分离血清，除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；整个试验大约需要4个小时。通常测试步骤如下：

(1)、血清分离：

用2ml或5ml注射器，被检鸡翅静脉采血2-3ml，室温静置数小时或离心2000r/min 10min左右至析出血清。

(2)、1％红细胞悬液制备：

采集至少3只SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合，用pH7.2，0.01mol/l.PBS液洗涤3次，每次均以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS配成体积分数为1％红细胞悬液，4℃保存备用。

(3)、抗原滴定与校正：

血凝试验(HA)操作术式

注：第12孔为红细胞对照。

能使红细胞完全凝集(100％凝集，++++，不流淌)的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位(HAU)。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。如果抗原标定错误，将直接影响试验结果，甚至如果抗原小于4个单位时整个试验都不成立，要从头再来。因此抗原稀释为4个单位后，一般还要进行校正。

(4)、HAU抗原校正：

(5)、血凝抑制试验(HI)操作术式：

注：第11孔为4HAU抗原对照，第12孔为红细胞对照。

现有测试方法存在以下缺点：方法繁杂、反应时间长、所用器材较多、采血困难等问题，因此，只用于小型化验室，不适于现场应用。

发明内容：

本发明就是提供一种适于现场使用的病毒血凝抑制试验工作液的生产方法及其应用装置。

本发明的病毒血凝抑制试验工作液的生产方法如下：

本发明包括柠檬酸钠100g-300g、葡萄糖400g-600g、氯化钠150-170g、氯化铬1-5g、叠氮钠10g-20g，加入1000ml水中，以NaOH调pH至7.0。

一种病毒血凝抑制试验工作液的应用装置，包括箱体，箱体是由箱盖、具有提手的箱底组成，其结构要点箱盖的挡板内设置有平板玻璃；箱底上设置有检测工具盒，检测工具盒内设置有分隔，分隔内设置有药剂瓶、微量吸液器、血凝反应板、离心管、离心管架、吸管、平皿、具有灯泡的鸡白痢检测器。

本发明的有益效果：

本发明的病毒血凝抑制试验工作液的生产方法是一种固定抗体稀释抗原的方法，预先将抗原在实验室进行标定，试验时只需采取被检鸡的一滴全血，省略了现有标准HI法的制备红细胞悬液、分离被检血清、标定抗原等一系列繁琐的准备工作和相应的设备与器材，鸡采血量从1毫升以上降至0.05毫升(1滴)，解决了现有方法雏鸡采血困难的问题；可将现有标准法的4小时以上缩短为本法的40分钟以内，又不影响试验结果的敏感性和特异性。可以装配成试剂盒，适用于现场室温下各日龄及各种类型养殖场鸡含血凝素病毒的抗体监测。

本发明的病毒血凝抑制试验工作液的应用装置：

(1)适于现场使用：