[发明专利]一种重组杆状病毒快速筛选方法

权利要求书

1.一种重组杆状病毒快速筛选方法，其特征在于杆状病毒囊膜表面蛋白基因与标签蛋白基因进行融合，构建带有杆状病毒囊膜表面蛋白基因和标签蛋白基因的转移载体；转移载体与野生型病毒DNA共转染病毒敏感细胞，等细胞发病后将得到的病毒液通过能与标签蛋白亲和的凝胶进行亲和层析，利用展示在病毒囊膜表面的标签蛋白分离、纯化重组杆状病毒。

2.根据权利要求1所述的一种重组杆状病毒快速筛选方法，其特征在于昆虫杆状病毒囊膜表面蛋白基因是存在于杆状病毒基因组上的核苷酸序列，包括gp64、p74、gp41或p25。

3.根据权利要求1所述的一种重组杆状病毒快速筛选方法，其特征在于其中所述的标签蛋白基因是精氨酸标签(Arg-tag)、谷胱甘肽S-巯基转移酶、麦芽糖结合蛋白或硫氧还蛋白。

4.根据权利要求1所述的一种重组杆状病毒快速筛选方法，其特征在于克隆gst-gp64基因和cmv-rfp-polyA序列，将两段基因分别依次克隆到已有的pAp748质粒中，得到转移载体gst-gp64-rfp-pAp748；转移载体与柞蚕野生型杆状病毒DNA共转染樗蚕蛹精巢细胞；待细胞发病后收集病毒液，将病毒液经过GST吸附柱，洗脱吸附的病毒，得到重组杆状病毒；用收集的重组杆状病毒侵染樗蚕蛹精巢细胞，观察红色荧光蛋白的表达。