[发明专利]检测对象的检测、定量用试剂盒及检测、定量方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测对象的检测、定量用试剂盒及检测、定量方法。

背景技术

一直以来，作为检测被检体中的检测对象的方法，使用胶乳凝集法。所谓胶乳凝集 法，是检测生物体样品等流体中的抗原时，通过混合流体、和担载有与抗原特异性结合的抗 体或其片断的胶乳，测定胶乳的凝集程度，来检测或定量抗原的方法(例如，参照专利文献 1)。

根据该胶乳凝集法，作为检验体添加的抗原使多个胶乳结合抗体交联，促进胶乳 的凝集。这样，由于程序简单，因此能够简便且快速地检测抗原。然而，抗原微量时，不易发 生该交联，因而胶乳不充分凝集。因此，难以检测微量的抗原。

为此，广泛采用ELISA法或CLEIA法这样的利用酶底物反应的方法。这些方法中，例 如，使与抗原特异性结合的一次抗体与抗原结合，并使该一次抗体与具有酶的二次抗体结 合。其中，通过添加酶底物，测定酶催化反应的程度，来检测或定量抗原。

根据这些方法，例如如果使用发光试剂作为底物，则底物添加后的发光检测灵敏 度高，因此也能够检测微量的抗原。

专利文献1：特公昭58-11575号公报

发明内容

然而，在利用酶底物反应的方法中，必需要二次抗体、发光试剂、发光检测装置等 特殊的试剂、仪器，作业成本高。

此外，如图10所示，该方法由对样品和各试剂进行孵育的工序(ST110、ST130)、洗 净系统的工序(ST120)、测定发光的工序(ST140)等多个阶段构成，操作复杂。而且，各个阶 段所需要的时间非常长，不适于大规模处理。

本发明是鉴于以上情况完成的，其课题之一是提供能够快速、廉价且简便地检测、 定量检测对象的检测、定量用试剂盒以及检测、定量方法；进而，其课题之一是提供能够高 灵敏度地进行检测、定量的检测、定量用试剂盒以及检测、定量方法。

本发明人等发现，如果接近具有电荷的化合物，则会阻碍刺激响应性聚合物的凝 集，从而完成了本发明。具体而言，本发明提供如下的内容。

一种试剂盒，其特征在于，用于检测和/或定量检测对象，含有第1结合物和第2结 合物，

第1结合物：含有刺激响应性聚合物的第1物质和对上述检测对象的第1亲和性物 质相结合的结合物，

第2结合物：具有电荷的第2物质和对上述检测对象的第2亲和性物质相结合的结 合物，

第1亲和性物质和第2亲和性物质能够在上述检测对象的不同部位同时与上述检 测对象结合。

根据[1]所述的试剂盒，其特征在于，第1物质含有微粒状的磁性物质。

根据[1]或[2]所述的试剂盒，其特征在于，第2物质是亲水性的高分子化合物。

根据[1]～[3]中任一项所述的试剂盒，其特征在于，第2物质是聚阴离子或聚阳离 子。

根据[4]所述的试剂盒，其特征在于，聚阴离子是核酸或聚丙烯酸。

根据[4]所述的试剂盒，其特征在于，聚阳离子是聚烷基胺或聚乙烯亚胺。

一种检测检验体中的检测对象的方法，其特征在于，

包括如下工序：将第1结合物、第2结合物和所述检验体混合，置于刺激响应性聚合 物凝集的条件下，判断所述刺激响应性聚合物有无分散，所述第1结合物为含有刺激响应性 聚合物的第1物质和对所述检测对象的第1亲和性物质相结合的结合物，所述第2结合物为 具有电荷的第2物质和对所述检测对象的第2亲和性物质相结合的结合物，

第1亲和性物质和第2亲和性物质能够在所述检测对象的不同部位同时与所述检 测对象结合。

根据[7]所述的方法，其特征在于，第1物质含有微粒状的磁性物质，所述方法还包 括通过施加磁力将凝集的磁性物质分离的工序。

定量检验体中的检测对象的方法，其中，包括如下工序：

将第1结合物、第2结合物和所述检验体混合，并将该混合物置于刺激响应性聚合 物凝集的条件下，所述第1结合物为含有刺激响应性聚合物的第1物质和对所述检测对象的 第1亲和性物质相结合的结合物，所述第2结合物为具有电荷的第2物质和对所述检测对象 的第2亲和性物质相结合的结合物，

测定所述混合物的浊度，基于所述检测对象的量与浊度在所述规定条件下的关系 式，算出所述检验体中的检测对象的量。