[发明专利]IV型胶原样免疫反应性多肽

说明书

技术领域

本发明涉及IV型胶原样免疫反应性多肽及其抗体、IV型胶 原样免疫反应性多肽选出方法、免疫反应性抗体或免疫反应性 多肽的筛选方法、肾炎模型、慢性肾炎的检测方法、疫苗以及 肾炎治疗药。

背景技术

IV型胶原尚未被完全阐明。IV型胶原的众多分子相互结 合，多种类的成分关联其上，由此形成组织基底膜。另外，因IV 型胶原为组织基底膜的主要成分，从而也被称为基底膜胶原。 IV型胶原有α1链～α6链6种异构体，1分子IV型胶原由3种α链构 成。3种α链的构成因组织而异，胎盘来源的基底膜中富含α1、 α2链，在全身各组织的基底膜中都可看到。肾来源的基底膜特 异性富含α3链～α6链。

1分子IV型胶原分为三个区域，从N末端起的具有三螺旋结 构的7S和主三螺旋区(TH)、位于C末端区域的非螺旋结构的 NC1。从生物体组织中提取时，根据不同处理方法所得的区域 不同，一般方法为：用胃蛋白酶处理得到三螺旋区域，用细菌 来源的胶原酶处理得到NC1(非专利文献1)。

另一方面，肾炎根据症状大致分为“急性肾炎”与“慢性肾 炎”，各种各样的详细分类的肾疾病由专科医生命名。因通常称 为肾炎的疾病指“慢性肾炎”，本发明中在无特别说明的情况下 将“肾炎”与“慢性肾炎”作为同义使用。“慢性肾炎”包括所谓的 慢性肾炎、IgA肾病、微小病变型肾病、膜性肾病、继发性肾 病中的糖尿病性肾病、高血压性肾病等，但不限定于此。肾炎 每年新增透析案例3万人，无论是对于病人的生活质量(QOL)、 还是对于国民医疗费(每1例透析费用为600万日元/年)都是极 大的负担。透析的技术不断进步，但在发病的早期确定肾病变、 直接治疗肾炎的药剂尚不存在。其原因很大程度上是由于肾炎 的发病机制尚未被阐明。

另外，肾炎存在肾炎特有的抗原，世界上正在对各种抗原 物质进行研究(非专利文献2)。若抗原得到确定，就可望以之 为靶标物质进行诊断试剂与肾炎治疗剂的开发。已确定抗原的 唯一例子有肺出血-肾炎综合症(Goodpasture′s syndrome)(狭 义的抗肾小球基底膜(GBM)抗体肾炎)。有报告指出：该抗 原存在于α3链NC1的C末端36位氨基酸残基与N末端起的氨基 酸序列17-31、以及127-141(非专利文献3)等，任意一种抗 原的该部位都位于α3链上。另外，α3链上的17-31(氨基酸残 基数15个)以及127-141(氨基酸残基数15个)为从嵌合型α1 /α3NC1检索到的。

作为罕见的肾炎的肺出血-肾炎综合症属于“急性肾炎”，因 典型情况下2周左右即发展为重症状态，必须迅速进行确诊。确 诊中，使用肾活检的免疫组化染色，根据抗GBM的自身抗体免 疫球蛋白IgG有无沉淀来判断。

非专利文献1：Extracelluar Matrix IRL PRESS/OXFORD UNIVERSITY PRESS Oxford New York

非专利文献2：腎と透析(肾与透析)2005 July Vol59 No.1 东京医学社

非专利文献3：J.Biol Chem(1993)268，26033-26036

发明内容

发明要解决的问题

然而该检验存在如下问题：在样品采集时对患者造成痛苦 并具危险性，免疫组化染色中需要病理学专家的高度诊断能力。

因此，作为简便方法，可使用对血中出现的自身抗体进行 检测的ELISA(酶联免疫吸附试验)试剂盒(商品名：ネフロ スカラ—·GBM、进口商ニツシヨ—股份有限公司、销售商ニ プロ股份有限公司)。然而，根据上述ELISA试剂盒附带的说 明书以及所引用的文献(臨床機器·試(临床设备·试剂)、 Vol.20 No.3、367-374(1997))，只有肺出血-肾炎综合症的 自身抗体被高浓度地检测到，其他肾炎时仅能检测到与健康者 同样的低水平。根据该说明书，使用的抗原为牛GBM抗原，GBM 由以IV型胶原为主要成分的多种成分组成，考虑大小的话，为 GBM>IV型胶原>NC1>α3链的NC1>上述的各氨基酸残基 (抗原)。使用牛GBM作为抗原时，该巨大区域中没有其他的 肾炎的抗原，作为肾炎的检测是不充分的。另外，现在虽为日 本唯一获得许可并在医保范围内的诊断试剂，但存在因价格昂 贵且为进口商品而使用困难的问题。