[发明专利]肌醇六磷酸酶变体

权利要求书

1.肌醇六磷酸酶，其具有改进的热稳定性，热稳定性通过剩余活性表示， 所述肌醇六磷酸酶的剩余活性为SEQ ID NO：2所示肌醇六磷酸酶的剩余活 性的至少105％，其中剩余活性如下测定：将发酵上清分成两部分，一部分 在60℃温育30分钟，另一部分在5℃温育30分钟，接着在37℃pH5.5测 定二者针对对硝基苯磷酸的活性，用在60℃温育的样品的活性除以在5℃温 育的相同样品的活性；与SEQ ID NO：2相比，所述肌醇六磷酸酶的变化选自 下组中的一种：4P、46E、107G、111P、119K、162C、223E、241Q、273L、 276K、379K、385D、52C/99C、59C/100C、141C/199C、111P/241Q、31C、 202N、286Q、362K、362R、1*、52E、53V、76G、410E、 179K/180E/181K/182K/183V/184*/185*/186*、 114T/115Q/116A/117D/118T/119S/120S/121P/122D/123P/124L、或 114T/115Q/116T/117D/118T/119S/120S/121P/122D/123P/124L；

上述“/”表示所连接氨基酸的共同改变；“*”表示氨基酸的缺失。

2.权利要求1的肌醇六磷酸酶，其中所述变化选自下组中的一种： 141C/199C、52C/99C、59C/100C或？1P/241Q。

3.分离的核酸序列，其由编码权利要求1-2中任一项的肌醇六磷酸酶的 核酸序列组成。

4.核酸构建体，其包含权利要求3的核酸序列，所述核酸序列可操作地 连接于一个或多个指导肌醇六磷酸酶在合适的表达宿主中产生的调控序列。

5.包含权利要求4的核酸构建体的重组表达载体。

6.包含权利要求4的核酸构建体和/或权利要求5的表达载体的重组宿 主细胞。

7.产生权利要求1-2中任一项的肌醇六磷酸酶的方法，其包括

(a)培养权利要求6的宿主细胞以产生包含所述肌醇六磷酸酶的上清 液；和

(b)回收所述肌醇六磷酸酶。

8.组合物，其包含权利要求1-2中任一项的至少一种肌醇六磷酸酶，和

(a)至少一种脂溶性维生素；

(b)至少一种水溶性维生素；和/或

(c)至少一种选自锰、锌、铁、铜、碘、硒或钴的痕量矿物质。

9.权利要求8的组合物，其进一步包含至少一种选自下组的酶：淀粉酶， 磷酸酶，木聚糖酶，半乳聚糖酶，α-半乳糖苷酶，蛋白酶，磷脂酶和/或β- 葡聚糖酶。

10.权利要求8-9中任一项的组合物，其为动物饲料添加剂。

11.动物饲料组合物，其具有50至800g/kg的粗蛋白质含量并且包含权 利要求1-2中任一项的肌醇六磷酸酶或权利要求8-10中任一项的组合物。

12.用于改进动物饲料的营养值的方法，其中将权利要求1-2中任一项 的肌醇六磷酸酶或权利要求8-10中任一项的组合物添加至饲料。

13.降低动物粪便中肌醇六磷酸盐水平的方法，其包括用有效量的权利 要求11的动物饲料组合物喂养动物。

14.处理植物蛋白质的方法，其包括将权利要求1-2中任一项的肌醇六 磷酸酶或权利要求8-10中任一项的组合物添加到至少一种植物蛋白质或蛋 白质源的步骤。

15.权利要求1-2中任一项的肌醇六磷酸酶或权利要求8-10中任一项的 组合物的用于如下的用途：在动物饲料中；在动物饲料的制备中；用于改进 动物饲料的营养值；用于降低动物粪便中的肌醇六磷酸盐水平；用于处理植 物蛋白质；或用于从肌醇六磷酸酶底物中释放含亚磷的物质。