[发明专利]抗体纯化

权利要求书

1.一种用以从包含抗体或其抗原结合部分和至少一种宿主细胞 蛋白质的混合物生产宿主细胞蛋白质降低的抗体制品的方法，所述方 法包括以下步骤：

将所述混合物施加到在平衡缓冲液中的阳离子交换树脂，其中施 加量大于30克抗体/升阳离子交换树脂；

以多个洗涤步骤从所述阳离子交换树脂洗涤宿主细胞蛋白质，其 中所述多个洗涤步骤包括至少第一次洗涤和第二次洗涤，其中从第一 次洗涤到第二次洗涤电导率有增加，且其中所述第一次洗涤是用平衡 缓冲液进行的，第二次洗涤是用洗脱缓冲液和水的混合物进行的；

用洗脱缓冲液从所述阳离子交换树脂洗脱所述抗体形成第一洗 脱物；

将所述第一洗脱物施加到阴离子交换树脂，其中在将所述第一洗 脱物施加到阴离子交换树脂前，将所述第一洗脱物的pH和电导率调 整到与所述阴离子交换树脂的pH和电导率相似；和

获得包含所述抗体的第一流通物，

由此获得所述宿主细胞蛋白质降低的抗体制品，

其中所述抗体或其抗原结合部分是阿达木单抗或其抗原结合部 分。

2.权利要求1的方法，其中施加量为35-70克抗体/升阳离子交换 树脂。

3.权利要求1的方法，其中所述阳离子交换树脂为pH5，且施 加量为70克抗体/升阳离子交换树脂。

4.权利要求1的方法，其中包含抗体和至少一种宿主细胞蛋白质 的所述混合物在被施加到阳离子交换树脂前不被施以A蛋白捕捉。

5.权利要求1的方法，其中洗脱缓冲液和水的混合物包含40-50％ 洗脱缓冲液和50-60％水。

6.权利要求5的方法，其中洗脱缓冲液和水的混合物包含45％洗 脱缓冲液和55％水。

7.权利要求6的方法，其中洗脱缓冲液包含20mM磷酸钠和150 mM氯化钠。

8.权利要求1的方法，所述方法在pH7下进行。

9.权利要求1的方法，所述方法在pH5至pH7的pH下进行。

10.权利要求1的方法，所述方法在pH5下进行。

11.权利要求1的方法，其中将所述阳离子交换树脂形成柱子， 将包含抗体和至少一种宿主细胞蛋白质的混合物施加到所述柱子。

12.权利要求11的方法，其中所述阳离子交换树脂包含与磺酸基 连接的基于合成的甲基丙烯酸酯的聚合物树脂。

13.权利要求1的方法，所述方法还包括将第一洗脱物进行病毒 灭活步骤。

14.权利要求13的方法，其中病毒灭活是通过pH病毒灭活来实 现，以形成病毒灭活制品。

15.权利要求14的方法，其中将病毒灭活制品施加到阴离子交换 树脂，其中在将病毒灭活制品施加到阴离子交换树脂前，将病毒灭活 制品的pH和电导率调整到与阴离子交换树脂的pH和电导率相似。

16.权利要求15的方法，其中阴离子交换树脂的pH在pH7.7至 pH8.3的范围，病毒灭活制品的pH调整到pH7.7至pH8.3的范围。

17.权利要求16的方法，其中阴离子交换树脂的pH为pH8.0， 病毒灭活制品的pH调整到pH8.0。

18.权利要求15的方法，其中阴离子交换树脂的电导率在3.5 mS/cm至5.2mS/cm的范围，病毒灭活制品的电导率调整到3.5mS/cm 至5.2mS/cm的范围。

19.权利要求18的方法，其中阴离子交换树脂的电导率为5.0 mS/cm，病毒灭活制品的电导率调整到5.0mS/cm。

20.权利要求15的方法，其中所述阴离子交换树脂是Q琼脂糖 凝胶树脂。

21.权利要求15的方法，其中将阴离子交换树脂形成柱子，将病 毒灭活制品施加到所述柱子，由此获得第一流通物。