[发明专利]一种使用氢键吸附色谱分离纯化多肽的方法

权利要求书

1.一种使用氢键吸附色谱分离纯化多肽的方法，利用高浓度、高交联度的琼脂糖 凝胶介质和聚酰胺介质与目标多肽之间产生的强度不同的氢键吸附作用，从生物组织 提取物、蛋白水解物或多肽合成混合物中分离纯化多肽，分离步骤包括：

1)制备生物组织粗提物、蛋白水解物或多肽合成混合物；

2)氢键吸附介质包括10-30μm粒径、6-12％浓度的高交联度琼脂糖凝胶介质或 100-400目的聚酰胺介质；

3)流动相是不同比例的如下溶剂体系：水，乙腈-水，乙腈-乙酸-水，乙腈-三氟乙酸 -水；

4)洗脱方式：等度洗脱，线性梯度洗脱或分步的等度洗脱；

5)氢键吸附介质的预处理：交联琼脂糖凝胶介质直接在20％乙醇中装柱，平衡到初 始流动相即可使用；聚酰胺类介质预处理方法为，取聚酰胺粉末，加入95％乙醇 于室温110r/min振荡洗涤40-50min，倾出95％乙醇，再分别用5％氢氧化钠溶液 及30％乙酸溶液按相同方法洗涤，最后用20％乙醇洗涤装柱，平衡至初始流动相 即可使用；

6)配制好的流动相超声脱气或真空脱气10-30min，室温静置0.5-1h；

7)配制好的初始流动相平衡氢键吸附色谱柱两个柱体积，采用步骤4)的洗脱方式， 线性流速20～100cm/h，紫外检测器210-280nm或采用示差检测器在线监测，自 动收集馏分；

8)将步骤7)收集的馏分冷冻干燥，采用反相高效液相色谱C18柱检测纯度，以甲醇- 水、甲醇-乙酸-水、甲醇-三氟乙酸-水或乙腈-水、乙腈-乙酸-水、乙腈-三氟乙酸- 水为流动相，采用线性梯度洗脱，以B相溶解样品，紫外检测器210-280nm在线 监测，计算多肽收率；

9)质谱检测确定分子量并利用数据库确定氨基酸序列；

10)具有特殊生活活性的多肽在分离前后测定其活性，计算活性多肽回收率。