[发明专利]检测残留兽药的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全中兽药检测领域，具体涉及一种定性和定量检测样品中残留兽 药的荧光微球免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

在食品安全检测中，国内外主要采用GC-MS，LC-MS，酶联免疫吸附法(ELISA) 和胶体金标记免疫层析试纸条等技术，从而实现定性和定量检测。在食品安全检测中， 为了达到高效和快捷的目的，往往先用胶体金标记技术或ELISA进行初筛后，再对阳 性样本用GC-MS或LC-MS进行确证。由于以上方法均需借助昂贵而复杂的的仪器和 设备，成本高，同时对操作人员需要特殊培训，实验结果无法立即显示。因此不适合于 商检、防疫、畜牧生产者对怀疑对象的快速在线检测和监控。

免疫层析技术是出现于80年代初期的一种独特的免疫分析方式，它通常以条状纤 维层析材料为固相，通过毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，并同时使样品中的待测 物与层析材料上针对待测物的受体(如抗体或抗原)发生高特异高亲和性的免疫反应，层 析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测带)，通过酶反应或直 接运用可目测的标记物(如胶体金)而得到直观的实验结果(如显示出不同的颜色)。而 游离标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的。免疫层析技术常见的示 踪标记粒子有胶体金，乳胶，胶体硒、明胶等，其中运用最成功的标记物为胶体金。

但是，胶体金免疫层析试纸条存在以下缺陷：

(1)胶体金标记过程是静电吸附过程，是一种物理吸附，故在液相中稳定性较差， 往往造成已标记上的蛋白分子又再次脱落。    

(2)检测结果通过显示单一的紫红色条带来判断，颜色单一，难以实现多检和联 检。

(3)只有当金颗粒集聚到一定量时，人肉眼才能观察到紫红的条带，且该颜色条 带与背景对比度不大，从而限制了检测灵敏度。

(4)不同的材料基质效应明显，背景干扰非常大。

(5)检测灵敏度较低。

(6)无法实现定量检测。

目前也出现了利用量子点标记快速免疫层析试纸条的检测方法，但是此方法并不能 实现对检测物的定量检测。

发明内容

本发明的一个目的是针对上述现有技术的缺陷，提供一种灵敏度高，操作简便的定 性和定量检测残留兽药的荧光微球免疫层析试纸条；本发明的另一个目的是提供上述试 纸条的制备方法。    

为了实现上述目的本发明采取的一个技术方案是：

提供一种检测兽药残留的荧光微球免疫层析试纸条，它包括底板，以及在底板上依 次搭接地粘贴的滤纸，样本垫，玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜和吸水纸，其中所述的玻璃 纤维膜上喷涂有荧光微球标记的抗兽药分子单抗，所述的硝酸纤维素膜上包被有兽药分 子人工抗原作为检测区和包被有抗鼠抗体作为质控区。

所述荧光微球是用聚合材料或二氧化硅包裹荧光物质所制成的微球，其表面连接有 活性基团，或与链霉亲和素偶联，该微球的直径为0.01～10μm；所述聚合材料为聚苯 乙烯、乙烯和聚氯乙烯，所述荧光物质包括有机的或无机的荧光物质或由多种荧光物质 组成的掺杂物以及量子点。

所述的活性基团为-CHO、-COOH、-OH、-NH₂或-SH；所述荧光物质为菲咯啉 联钌有机染料、异硫氰根荧光素、异硫氰根罗丹明、6-羧基荧光素酰胺酯、香豆素或其 掺杂物或量子点。

本发明采取的另一个技术方案是提供一种制备上述检测残留兽药的荧光微球免疫 层析试纸条的方法，它包括如下的步骤：

1.硝酸纤维素膜的制备；

(1)制备兽药分子人工抗原；

为了制备硝酸纤维素膜，首先将兽药分子抗原与蛋白大分子通过共价偶联法制备检 测区所需的兽药分子人工抗原，兽药分子抗原可选自：克伦特罗、莱克多巴胺、氯霉素、 青霉素类、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、呋喃唑酮、呋喃西林；所述的大分子蛋白为牛血 清蛋白或卵清蛋白。制成的兽药分子人工抗原例如有：克伦特罗-BSA偶联物；莱克多 巴胺-BSA偶联物；氯霉素-BSA偶联物；青霉素类-BSA偶联物；磺胺嘧啶-BSA 偶联物；磺胺二甲嘧啶-BSA偶联物；呋喃唑酮-OVA偶联物；呋喃西林-BSA偶联 物。在单检时，制备检测区所需的兽药分子人工抗原可选自上述的兽药分子人工抗原之 一；在多检或联检时，可选择多个上述的兽药分子人工抗原组合起来使用。