[发明专利]沙眼衣原体的一种重组主要外膜蛋白及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及沙眼衣原体的一种重组主要外膜蛋白及其编码基因与制备方法和应用，特别是涉及沙眼衣原体的一种重组主要外膜蛋白及其编码基因与制备方法及在疫苗制备和衣原体检测中的应用。

背景技术

沙眼衣原体(Chlamydiat rachomatis，Ct)有15个血清型，可引起人类多种疾病，其中A～C型是引起沙眼的主要病原体，D～K型引起人的泌尿生殖道感染，在男性表现为非淋菌性尿道炎、前列腺炎、直肠炎等；在女性表现为子宫颈炎、输卵管炎、异位妊娠和不孕等疾病，L1～L3型主要引起性病淋巴肉芽肿。研究表明，Ct感染引起的性传播疾病(STD)不仅增加HIV感染的几率(Kilmarx PH，MockPA，Levine WC.Effect of Chlamydia trachomatis coinfection on HIV sheddingin genital tract secretions.Sex Transm Dis，2001，28：347-348)，而且使宫颈癌的发病率增加(Smith JS，Munoz N，Herrero R，et al.Evidence for Chlamydiatrachomatis as a human papillomavirus cofactor in the etiology of invasivecervical cancer in Brazil and the Pilippines.J Infect Dis，2002，185：324-3331.)。由于Ct感染病程隐匿，临床表现轻或无症状，以致感染反复迁延造成进行性、不可逆性病理变化以及耐药性菌株的产生等，给衣原体感染的治疗带来困难。因此，对Ct感染的快速准确诊断，具有十分重要的意义。

衣原体实验室诊断主要有以下3种方法：①衣原体分离与培养；②免疫学检测；③聚合酶链反应(PCR)。在所有方法中，细胞培养是最特异的，但其敏感性差异大；直接免疫荧光(DFA)和酶免疫测定法(EIA)对临床标本作抗原检测是快速且特异性均较好的方法。DFA法，针对沙眼衣原体主要外膜蛋白或脂多糖的单克隆抗体与相应的抗原结合，单克隆抗体标有荧光素，在荧光显微镜下，阳性者可见到亮苹果绿的原体和始体。此法的缺点是在低感染率的人群中敏感性差，易受实验人员的主观影响，优点是快速，价廉，操作简便，标本的贮存和运送方便，标本中的沙眼衣原体不必是活的或是有感染性的。

预防Ct感染最有效的方法是疫苗，随着分子生物学的发展，人们对Ct抗原的结构和功能有了深入的了解，Ct主要外膜蛋白(Major outer membrane protein，MOMP)是衣原体外膜复合物上的主要成分，占外膜蛋白总量的60％以上，为属特异性抗原，又是其最主要的保护性抗原。进一步研究发现Ct的MOMP能够刺激机体产生细胞免疫和体液免疫，以阻止或削弱衣原体的感染。用天然结构的外膜复合物(富含MOMP)制备疫苗可防止绵羊、豚鼠及小鼠患衣原体的感染。有人用MOMP-霍乱毒素-CpG佐剂联合疫苗经皮肤接种小鼠，不但能使生殖道粘膜产生特异性IgG、IgG抗体，且可生成分泌γ干扰素的Th1细胞，使细胞内外的衣原体得到彻底清除(Berry LJ，Hickey DK，Skelding KA，et al.Transcutaneous immunizationwith combined cholera toxin and CpG adjuvant protects against Chlamydiamuridarum genital tract infection.Infect Immun，2002，70：4812-4916.)。

发明内容

本发明的发明人对Ct MOMP保护性抗原进行了克隆表达，获得了较高的产物表达率。

本发明的目的是提供Ct的一种重组MOMP及其编码基因。

本发明所提供的Ct重组MOMP，是具有序列表中序列2氨基酸残基序列的蛋白质，或者是将序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加且具有与序列2的氨基酸残基序列相同活性的由序列2衍生的蛋白质。

序列表中序列2的蛋白质由394个氨基酸残基组成，在实际应用中，优选的是序列表中序列2的蛋白质。

Ct重组MOMP的编码基因，是下列核苷酸序列之一：

1)序列表中序列1的DNA序列；

2)与序列表中序列1限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码相同功能蛋白质的DNA序列。