[发明专利]一种HPLC法分析分离芬替康唑及其中间体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种硝酸芬替康唑及其中间体分析与分离测定方法，尤其是一种 采用高效液相色谱法分析分离硝酸芬替康唑及其中间体的方法，用该方法可以快 速的分离分析硝酸芬替康唑及其中间体杂质。

背景技术

硝酸芬替康唑属于一种咪唑类药物，由于其疗效好、毒性低、耐受性良好， 被广泛应用于真菌病治疗，其结构式为

在其合成的过程当中会引入五个中间体，其结构式分别为

中间体1中间体2

中间体3中间体4

               中间体5

对于合成硝酸芬替康唑的过程中引入的中间体杂质，不论是在原料药还是制 剂的过程中都是需要进行质量控制的。因此，实现硝酸芬替康唑及其中间体的分 离在硝酸芬替康唑合成和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。

经反复试验发现，用以辛基键合硅胶为固定相的色谱柱(C8(250mm×4.6 mm))，采用甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠，pH＝4.0)＝80：20为流动相，可以 将硝酸芬替康唑及其中间体杂质进行有效分离，从而可以准确控制硝酸芬替康唑 原料药及制剂的质量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析硝酸芬替康唑的 纯度和含量并能有效的控制中间体杂质。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分析分离硝酸芬替康唑及其中间体杂质的高效 液相色谱方法，从而实现硝酸芬替康唑及其中间体杂质的分离测定。

本发明所说的用高效液相色谱法分析分离硝酸芬替康唑及其中间体杂质的 方法，是采用以烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，一定比例的有机相—缓冲液为 流动相。

上述所说的烷基键合硅胶为固定相的色谱柱选自C8色谱柱。

本发明的流动相中的有机相选自下列化合物：乙腈、甲醇。

本发明的方法，有机相—缓冲液的比例为70：30～90：10。

上述所述的缓冲液的浓度范围为0.01mol/L～0.03mol/L，缓冲液的pH范围 为3.5～4.5。

本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：

(1)取硝酸芬替康唑和各中间体样品适量，用甲醇溶解样品，配制成每1mL 含硝酸芬替康唑和各中间体0.5mg的混合样品溶液。

(2)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为215nm，色谱柱温度为室 温。

(3)取(1)的样品溶液20μL注入液相色谱仪，完成硝酸芬替康唑及其中间体 杂质的分离与分析。

其中：

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-M10Avp，

色谱柱：C8(250mm×4.6mm)色谱柱

流动相：甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠，pH＝4.0)＝80：20(v/v)。

流速：1.0mL/min

检测波长：215nm

柱温：室温

进样体积：20μL

本发明采用C8(250mm×4.6mm)色谱柱，能够有效的分离分析硝酸芬替 康唑及其中间体杂质；选择甲醇溶解样品，确保了溶液的稳定性；选择进样体积 20μL，柱温为室温，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了含硝酸芬替康唑的 原料药与其中间体杂质的分离与分析问题，从而确保了硝酸芬替康唑原料药及其 制剂的质量可控。(结果见附图1)

附图说明

图1最优选条件的HPLC图

图1中1号峰为硝酸、2号峰为中间体3，3号峰为中间体1，4号峰为中间 体2，5号峰为中间体5，6号峰为中间体4，7号峰为芬替康唑，可以看出在该 条件下芬替康唑主峰可以和五个中间体完全分离开来，且芬替康唑主峰在13min 左右。

图2流动相为乙腈—(0.01mol/L磷酸二氢钠，pH＝4.0)＝80：20(v/v) 的HPLC图。

图2中1号峰为硝酸、2号峰为中间体3，3号峰为中间体1，4号峰为中间 体2，5号峰为中间体5，6号峰为中间体4，7号峰为芬替康唑，可以看出在该 条件下芬替康唑主峰可以和五个中间体完全分离开来，且芬替康唑主峰在11min 左右。

图3流动相为甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠，pH＝4.5)＝80：20(v/v) 的HPLC图