[发明专利]用于epothilone生物合成的基因

权利要求书

1.一种分离的核酸分子，其中包含编码至少一种参与epothilone生物合成的多肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列的互补体能够与选自下组的核苷酸序列在下面定义的杂交条件下杂交：SEQ IDNO：1的核苷酸43524-54920；所述杂交条件是在7％十二烷基硫酸钠、0.5M NaPO₄pH7.0、1mM EDTA中于50℃杂交，在2×SSC、1％SDS中于50℃洗涤。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中包含其互补序列能与选自下组的核苷酸序列在下面定义的杂交条件下杂交的核苷酸序列：SEQID NO：1的核苷酸43524-54920；所述杂交条件是在65℃杂交36小时，并用0.1×SSC和0.5％SDS于65℃洗涤20分钟3次。

3.权利要求1或2的分离的核酸分子，其中包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：6。

4.权利要求1或2的分离的核酸分子，其中包含选自下组的核苷酸序列：SEQ ID NO：1的核苷酸43524-54920。

5.一种分离的核酸分子，其中包含参与epothilone生物合成的核苷酸序列，所述核苷酸序列的互补体能够与选自下组的核苷酸序列在下面定义的杂交条件下杂交：SEQ ID NO：1的核苷酸42528-44760；所述杂交条件是在7％十二烷基硫酸钠、0.5M NaPO₄ pH7.0、1mM EDTA中于50℃杂交，在2×SSC、1％SDS中于50℃洗涤。

6.权利要求5的分离的核酸分子，其中包含其互补序列能与选自下组的核苷酸序列在下面定义的杂交条件下杂交的核苷酸序列：SEQID NO：1的核苷酸42528-44760；所述杂交条件是在65℃杂交36小时，并用0.1×SSC和0.5％SDS于65℃洗涤20分钟3次。

7.权利要求5或6的分离的核酸分子，其中包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：6。

8.权利要求5或6的分离的核酸分子，其中包含选自下组的核苷酸序列：SEQ ID NO：1的核苷酸42528-44760。

9.权利要求1-8中任何一项的分离的核酸分子，其中所述核苷酸序列分离自粘细菌。

10.权利要求9的分离的核酸分子，其中所述粘细菌是纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)。

11.一种嵌合基因，其中包含权利要求1-10中任一项的核酸分子以及与之可操作连接的异源启动子序列。

12.一种重组载体，其中包含权利要求11的嵌合基因。

13.一种重组宿主细胞，其中包含权利要求11的嵌合基因。

14.权利要求13的重组宿主细胞，它是细菌。

15.权利要求14的重组宿主细胞，它是放线菌(Actinomycete)。

16.权利要求15的重组宿主细胞，它是链霉菌(Streptomyces)。

17.一种Bac克隆，其中包含权利要求1-10中任一项的核酸分子。

18.权利要求17的Bac克隆，它是pEP015。

19.在重组宿主中异源表达epothilone的方法，包括：

a)将权利要求11的嵌合基因导入宿主；和

b)在适合宿主生物合成epothilone的条件下培养宿主。

20.生产epothilone的方法，包括：

a)用权利要求19的方法在重组宿主中表达epothilone；和

b)从重组宿主中提取epothilone。