[发明专利]一种东方百合组织培养脱毒的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种东方百合组织培养脱毒的方法。

背景技术

东方百合(Lilium spp.cv.oriental hybrids)是百合属中的一个杂交品系，是国际市场上最受欢迎的球根花卉之一。由于市场的巨大需求，我国每年要从国外大量进口东方百合开花球和种植母本，仅以2006年为例，进口开花球约7000万头、种植母本约800万头。不仅耗费大量外汇，而且增加了企业的经营成本和风险。

目前，东方百合种苗的人工培育均采用常规的植物组织培养方法，即以鳞片为外植体，先诱导愈伤组织，转接后使愈伤组织分化出根和茎，进而培养成瓶苗。但如果外植体带病毒，则该方法只能降低种苗的病毒含量，难以使种苗彻底脱除病毒。病毒会在鳞茎逐年种植中积累，造成种球品质和优良性状的退化。同时，瓶苗移栽后还必须经过练苗过程，以使幼苗缓慢适应移栽环境。此时幼苗的成活率主要取决于练苗设施的好坏和管理者的精细程度，不仅生产周期过长，而且增加了生产管理的成本。根据报道，目前有12种病毒能够危害东方百合生长，其中百合花叶病毒(LiMV)、百合无症病毒(LSV)和黄瓜花叶病毒(CMV)是危害最严重的病毒，如果脱掉这三种病毒，便可以基本保证百合的品质。目前国内外有关百合的脱毒处理都是单独采用茎尖、药物或热处理方法，这些方法效率低，脱毒效果差，大多脱毒率在30％以下。近年来有采取株芽用热水(50±1)℃处理40分钟后，切取茎尖的方法，虽获得了一定的效果，但组织培养球在50℃的高温下处理40分钟后，其成活率较低；同时由于珠芽未经消毒，经热处理和切除茎尖后，也难以保证不受污染。迄今为止，现有技术中尚未见能有效克服上述问题的方法报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种成本低廉，效果显著的东方百合组织培养脱毒方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

一种东方百合组织培养脱毒的方法，该方法采用以下步骤：

1、在生长后期选择生长健壮的东方百合植株，取出鳞茎，从鳞茎上分下鳞片，并用清水清洗、消毒后，在无菌条件下，将鳞片分切为3～5块，将切好的鳞片置于发生培养基上进行无菌培养，设定培养温度为22℃～25℃、光照强度为1000lx～4000lx，培养60天后诱导出不定芽；

2、将不定芽转接到生长培养基上，在人工气候培养箱中变温培养30天，所述的变温培养条件为每天在温度为37℃、光照强度为1000lx～4000lx的条件下培养12小时，在温度为22℃、黑暗环境下培养12小时，两者交替进行；

3、经过30天变温处理后，在无菌条件下，切取0.8～1.0mm茎尖移植到生长培养基中继续变温培养，培养条件为光照/黑暗各12小时交替进行，光照时，培养温度为22℃～25℃、光照强度为1000lx～4000lx；黑暗时，温度为22℃～25℃；培养30～60天后，便可得到所需的无毒株系。

所述的发生培养基为含萘乙酸(NAA)0.05～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含琼脂0.65％的MS高盐培养基或1/2MS高盐培养基。

所述的生长培养基为含萘乙酸(NAA)0.05～0.1mg/L、含蔗糖7％～9％、含琼脂0.65％的1/2～1/5MS高盐培养基。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

1.通过在变温处理条件下保证组织培养球的生长，同时钝化病毒，减少病毒转移到茎尖，保证生长点不带毒，然后切取0.8～1.0mm茎尖培养，来到达脱毒的目的。

2.脱毒效果显著，效率高，一般品种可达到90％～100％。

具体实施方式

为了更好地理解本发明的实质，下面结合实施例和实验例对本发明作进一步说明，但它们不是对本发明的限制。

实施例1