[发明专利]嗜热地芽孢杆菌DM－2产生的生物乳化剂及制备方法和应用

权利要求书

1.一种嗜热地芽孢杆菌Geobacillus.sp DM-2保藏号CGMCC No.1565产生的新型糖蛋白类生物乳化剂。

2.如权利要求1所述的生物乳化剂，其特征在于该生物乳化剂仅含有蛋白质和多糖；多糖组分仅有一种葡萄糖组成，蛋白组分由赖氨酸，丙氨酸，缬氨酸，甲硫氨酸和甘氨酸五种氨基酸组成。

3.如权利要求2所述的生物乳化剂，其特征在于乳化剂的性质测定方法用Molish反应判定糖类，用Bradford比色法测定蛋白，油红O染色测定脂类。

4.如权利要求2所述的生物乳化剂，其特征在于乳化剂多糖组分组成的分析方法是，取该物质5mg加入2M H₂SO₄中，沸水浴10h以上，用BaCO₃中和H₂SO₄，离心除去沉淀，得水解后样品与单糖标准品在新华1号滤纸上经正丁醇∶冰乙酸∶水＝4∶1∶5的展开剂展开，9h后风干，喷显色剂苯胺-磷酸盐溶液；再风干后，于100℃显色2-5min，计算样品与标准品的Rf值；其中显色剂苯胺-磷酸盐溶液是由苯胺-磷酸溶液与丙酮按2∶3混配而成，苯胺-磷酸溶液是由苯胺∶水∶冰乙酸∶磷酸＝2∶20∶18∶1混配而成。

5.如权利要求2所述的生物乳化剂，其特征在于乳化剂蛋白组分氨基酸组成的分析方法是，取该物质1mg加入6NHCl中，110℃水解24h以上，将HCl蒸干后，溶于双蒸水中，得水解后样品与氨基酸标准品在新华1号滤纸上经正戊醇∶吡啶∶水＝35∶35∶30的展开剂展开，9h后风干，用10％茚三酮100℃显色10min，计算样品与标准品的Rf值。

6.一种权利要求1所述的生物乳化剂的制备方法，其特征在于在培养嗜热地芽孢杆菌Geobacillus sp.DM-2的过程中，向无机盐培养基中添加碳水化合物，即淀粉、乳糖、蔗糖或葡萄糖为碳源，其培养基组成如下g/L：K₂HPO₄·3H₂O 4.8；KH₂PO₄ 1.5；(NH₄)₂SO₄1；柠檬酸三钠0.5；MgSO₄·7H₂O 0.2；葡萄糖2；酵母提取物0.1；CaCl₂·2H₂O 0.002；MnCl₂·4H₂O 0.0004；NiCl₂·6H₂O 0.0004；ZnSO₄·7H₂O 0.0004；FeCl₃·6H₂O 0.0002；NaMoO₄·2_H2O 0.0002；培养条件50～70℃，pH 6～8，培养24～48小时，以丙酮沉淀透析法和酸沉法分离乳化剂，最后得到生物乳化剂。

7.如权利要求6所述的生物乳化剂的制备方法，其特征在于生物乳化剂的分离提取方法是，将权利要求6所述的培养发酵液8000rpm 4℃离心除去菌体后，加入3倍体积冰冷丙酮或者工业酒精，用玻璃棒搅拌均匀，置于4℃过夜，离心得沉淀，用2000ml无菌水回溶，4℃透析，然后冷冻干燥，得乳化活性物质。

8.如权利要求1所述的生物乳化剂，其特征是其能很好的乳化柴油、煤油、正烷烃、原油和芳香族化合物。

9.一种权利要求1所述的生物乳化剂在提高烷烃和原油在水中的溶解度，促进解烃菌活性菌株对烷烃摄取和原油降解的效率，以及提高石油采收率中的应用。