[发明专利]含人血清白蛋白与皮肤细胞生长因子的融合蛋白护肤产品制备工艺和用途

说明书

技术领域

本发明是中国发明专利ZL021428816，ZL2004100428148和中国专利申请200710057571.9的继续申请。本发明涉及基因重组及表达的人血清白蛋白融合蛋白应用于制备新型基因化妆品的方法，并涉及单一融合蛋白或不同融合蛋白组合使用的配比、融合蛋白和酵母发酵中产生的酵母酵素(多糖和酵母蛋白)的共同使用。特别涉及利用酵母菌表达生产由人血清白蛋白(HSA)与人细胞生长因子(GF)所形成的融合蛋白(HSA/GF)用于制作新型化妆品。化妆品中含有的细胞生长因子融合蛋白包括，但不局限于，人表皮细胞生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、角质细胞生长因子(KGF)和类胰岛素生长因子(IGF)、TGF、GCSF、干扰素、IL-11等。所制备的化妆品中，除了含有人血清白蛋白融合蛋白外，还含有保湿剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、酵母酵素、或、和动、植物提取物等。利用本发明制备的化妆品有着意想不到的优势和良好效果。

背景技术

皮肤保养品(化妆品)作为现代人类生活中，尤其是女性生活的必需品。各种化妆品从保湿、除皱、美白、祛斑，除痘来改善生活质量和解决皮肤在生活中和在年龄增长中皮肤细胞产生的损坏、退化、功能衰减等具体问题。各种化学品、动植物提取物、人源的组织提取物、和重组的蛋白质多肽陆续用作添加剂和主要功能成分制作化妆品。其中人表皮细胞生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、人血清白蛋白(HSA)等以人源或基因重组表达产物形式，被用于化妆品中，并作为主要功能成分。由于这些细胞因子是蛋白氨基酸多肽，体外寿命短，需要添加各种保护剂，来延长其货架寿命和在应用后的有效作用时间。在于在林等的中国专利申请200710057571.9中，发明了将这些皮肤细胞生长因子与人血清白蛋白基因融合的技术，验证了这些细胞生长因子的寿命大大延长了。

人血清白蛋白(HSA)是一种可溶性单体蛋白质，构成血液中蛋白总量的一半。白蛋白作为一种基本载体，携带传递脂肪酸、类固醇和激素分子等，其稳定的惰性性质是维持血压的一个重要因素。血清白蛋白是一种球状非糖基化的、分子量为65千道尔顿、具有585个氨基酸的血清蛋白质。这一蛋白(白蛋白前体)再通过高尔基体的转化加工，去除引导多肽，而分泌到细胞外。血清白蛋白有35个半胱氨酸，在血液中，白蛋白是一个有17个二硫键的单体(参见Brown JR，“白蛋白的结构、功能和应用”Pergamon，纽约，1977)。现在用于临床的白蛋白均是从人血浆中提取的。利用微生物重组表达白蛋白(rHSA)的生产已在专利EP330451、EP361991和于在林等的中国专利申请CN2004010057313.7中公开。

白蛋白是血液中的主要成分，在人体内含量为每升血液含40克，其半衰期寿命为14-20天。综上所述，治疗性蛋白质与白蛋白形成融合蛋白后，融合蛋白将具有极大的优势使之可抵御生物体内酶解作用，并可使治疗性蛋白质在体内体外的寿命大大提高，还可以较高剂量使用。

人源或重组人血清白蛋白在美容产品中的使用已获得了十分有意义的实际应用。在欧洲专利公开#0180968A3中人血清白蛋白用于抗皱产品的组成，PCT专利申请WO02/49671A1中人血清白蛋白用于皮肤和毛发的清洁剂组成。美国专利申请10/446,562中人血清白蛋白与肉毒杆菌合并使用组成具治疗性和美容性的产品有着具体的描述。PCT专利申请WO01/91713A1描述了来源于转基因动物的人血清白蛋白用于美容目的产品中。美国专利US5,948,609指出，白蛋白的全长或片断或修饰的形式应用于化妆品制备。中国专利申请CN02111695、CN1090753、CN93105601.2、和CN01810411.8中描述了人血清白蛋白作为添加剂、保护剂在化妆品中的使用。中国专利申请CN200610081498.4特别描述了重组人血清白蛋白和酵母酵素混合物的制备工艺和在皮肤保湿、防皱、除皱、美白方面的用途。

在药物制剂组成中，白蛋白也常被用作药物的稳定剂，尤其是生物药。

利用基因工程技术，将人血清白蛋白与治疗性蛋白质基因融合在酵母菌中表达为融合蛋白，可增加治疗性蛋白质在血清中和储存时的稳定性，和较长的半衰期，达到蛋白药物的长效化。该项蛋白药物体内修饰公共技术平台，在于在林、富岩中国授权专利ZL02142881.6和ZL200410042814.8中已公开，在此引为参考文献。人血清白蛋白融合蛋白用于化妆品的制备，改善细胞因子的寿命和为这种新型基因化妆品的实际应用效果带来了意想不到的临床使用最大效果。