[发明专利]规模化昆虫病原线虫活体高倍培殖方法

权利要求书

1.一种规模化生产昆虫病原线虫活体高倍培殖方法，其特征在于改目前的离体繁殖为活体繁殖，其步骤如下：

a.介质与繁殖袋质地筛选：寄主昆虫采用黄粉虫，培养介质选用价格便宜的蛭石，蛭石用自来水浸泡，洗干净，然后在60℃烘箱中烘干至恒重；

侵染前期准备：把1Kg蛭石装在布袋中浸泡在蒸馏水桶中，完全浸泡之后，取出布袋，挂起来，晒干直至布袋上不滴水，再称布袋的重量，计算蛭石含水量，即蛭石完全浸透所需水量；

侵染：将线虫悬液，配成一定浓度的线虫悬浮液，将一定浓度的线虫悬浮液喷在蛭石上，使蛭石完全湿透，没有水溢出为宜；

布袋是17×26cm大小，布料质地选用纯棉，设侵染每头末龄黄粉虫的异小杆线虫剂量为50条IJ、斯氏线虫100条IJ；

b.培养介质不灭菌；

c.繁殖袋不用翻动；

d.侵染剂量筛选：寄主昆虫与培养介质混合比例、收获时间、繁殖袋大小进行正交组合试验，寄主昆虫和培养介质处理同a步，寄主昆虫(黄粉虫)与培养介质(蛭石)混合比例为三比二；异小杆线虫侵染剂量是800条侵染期线虫/克黄粉虫或斯氏线虫侵染剂量是1600条侵染期线虫/克黄粉虫；繁殖袋大小选用17×26cm；异小杆线虫的收获时间是培养12天时开始收获，将布袋浸泡并收获5次，培养15天时再次收获，将布袋浸泡并收获3次，斯氏线虫的收获时间是培养10天时开始收获，将布袋浸泡并收获5次，培养13天时再次收获，将布袋浸泡并收获3次；

e.收获方法优化：收获后将线虫悬浮液沉淀，移去上清液后再用放在瓷盘上的面巾纸过滤除去杂质；

f.规模化生产：选择以上筛选出的最佳培养参数，将繁殖袋悬挂在25℃装有空调的房间里，每天观察悬在繁殖袋上的弹簧秤的读数，以监控繁殖袋的失水量，当失水达到50％时，应用蒸馏水喷湿布袋。