[发明专利]一种鸡白细胞介素18基因真核表达质粒构建及免疫效应

说明书

[技术领域]本发明涉及动物医药生物工程领域，是一种鸡白细胞介素18基因真核表达质粒构建及免疫效应。

[背景技术]细胞因子作为机体内细胞之间相互作用的主要介质，在机体的免疫应答、炎症反应、造血功能、胚胎发育及机体的生长发育等各个方面都起重要作用。20世纪80年代以来，随着细胞因子的研究进展，人们逐渐认识到细胞因子的免疫增强作用。细胞因子对免疫细胞的分化和增殖、抗原的识别和提呈、抗体的产生和调节、免疫细胞之间的联络等一系列从识别到效应的免疫应答过程都有极其重要的作用。可以说细胞因子对于免疫系统就如滋素对于内分泌系统，神经递质对神经系统一样重要。细胞因子控制着疫苗免疫和病原微生物感染机体后免疫应答的类型和方向，其对免疫应答的调节方式最为接近机体正常的调节机理，细胞因子作为疫苗增强剂具有其他佐剂无法比拟的优点。

白细胞介素18是一种在机体免疫调控中具有重要作用的细胞因子，在免疫网络调节中具有重要作用，它在结构上类似于IL-1家族而在功能上更接近于IL-12。具有多种生物学功能。它可激活NK细胞，刺激激活的T细胞产生GM-CSF、IL2、IFN-γ，抑制激活的T细胞产生IL-10。此外，IL18是一种多效性的细胞因子，除免疫学功能外，还具有抗真菌、抗肿瘤、抗病原微生物以及抗超敏反应等生物学功能。最初是1995年由0kmura等从中毒性休克小鼠的肝细胞中分离并克隆出来的。由于这种细胞因子具有强烈的IFN-γ诱生能力，因此最初被命名的IFN-γ诱生因子。1996年Ushio等以鼠IGIF为探针从正常人肝脏cDNA文库中克隆到了人类IGIF的基因并通过在大肠杆菌中表达获得了重组蛋白，鉴于其氨基酸序列与已知数据库中任何蛋白均不同，且生物学活性多样，故被重新命名IL18。人们研究发现，其可通过调节IFN-γ的表达提高机体的免疫水平，从而达到预防和控制微生物感染，抑制肿瘤发生的目的。

IL18可以诱导Th1细胞和NK细胞产生IFN-γ，这是它最主要的一个生物学功能。IL18通过IRAK/TRAF6信号途径，使NF-κB和AP-1在细胞核内与IFN-γ基因启动子中特定的DNA调节序列相结合，激活IFN-γ启动子，从而使IFN-γ基因表达和蛋白合成。IL18除可以诱导Th1细胞和NK细胞产生IFN-γ外，有研究表明IL18和IL12共同作用时可使抗CD40抗体活化的高度纯化的鼠B细胞产生IFN-γ。此外IL18还可以刺激T细胞产生IL2、GM-CSF和TFN-α，外周血细胞在在IL18刺激24h后，可检测到IL-1β和IL-8产生。IL-18除了可以促进IFN-γ、IL-2和GM-CSF等Th1型细胞因子产生外，最近研究发现，静息T细胞可表达低水平的IL-18Rα，在IL-18作用下能产生IL-13。嗜碱性粒细胞和肥大细胞在IL3和IL-18刺激下也可产生IL-4和/或IL-13。CD4+静息T细胞与IL-18和IL-2共同培养时可产生大量的IL-13和少量的IL-4，若用抗CD3分子单克隆抗体刺激培养物，可增加他们产生Th2型细胞因子的能力。可见IL-18不仅在Th1反应中有重要作用，而且在Th2反应中也发挥一定作用，是一种多功能型的细胞因子。