[发明专利]水痘减毒活疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及疱疹病毒科的医用微生物，具体为一种水痘减毒活疫苗。

背景技术

水痘是由水痘-带状疱疹病毒(VZV)引起的高度接触传播的常见呼吸道传染病，水痘病毒是一种人α-疱疹病毒，能导致两种人类疾病：初次感染好发年龄为10岁以下儿童，导致儿童水痘，此后病毒变为潜伏并常常重激活(通常几十年后)产生带状疱疹。原发感染可致患者不同程度的典型疾病，尤其对免疫功能低下及接触免疫抑制剂治疗者，后果更为严重。患水痘时，病毒透入外周神经系统并潜伏直至以痛苦的带状疱疹形式重激活。由于病毒是潜伏的，大部分病毒基因的表达被抑制。VZV感染具有存在最小量的自由病毒的特征，在潜伏状态和重激活时，病毒主要在细胞内。相应的，甚至使用高浓度中和抗体和依赖于细胞介导免疫的病毒控制也不能预防复发疾病。目前对水痘的治疗并无专用有效药物及治疗方法，常规以预防为主，通过接诊水痘疫苗的方法预防感染水痘-带状疱疹病毒(VZV)，因此用安全有效的水痘疫苗对高危人群进行免疫已日益受到人们的重视。

在国内由于国家对预防的日益重视，水痘疫苗市场的增长速度呈快速增长态势。虽然目前中国水痘疫苗市场还处于萌芽状态，但市场潜力巨大。我国每年出生婴儿超过1500万，存在着巨大的儿童免疫接种市场；同时随着人民生活水平的进一步提高，由消费者自己负担的成人有价免疫市场也将会有大幅度的提高。依据有关资料显示，国内水痘疫苗市场增长率将达到15％，远远高于全球10％的增长率。

我国拥有将近13亿的人口，根据全国人口和经济实力，可以将市场定位于城市人口，按中小学生和儿童以及老年人的数量计算，应在1亿以上，按其中的20％的人进行预防接种，全国的潜在市场应为2000万人份左右，同时随着人民生活水平的提高和市场宣传的深化，最新疫苗技术的创新及人们对免疫和病原体抵抗力认识的进展，市场将逐步扩大。

要获得安全有效的水痘疫苗，需解决的主要关键技术及试验内容有：

1.病毒培养：包括细胞培养的条件，病毒的接种量，病毒的培养条件和收获条件以及细胞培养液和病毒培养液的成分等。

2.病毒纯化：包括病毒超声的时间、频率等。

3.冻干方法：比较在不同的冻干工艺下生成的疫苗产品的质量。

4.疫苗稳定剂的配方：比较不同配方的疫苗稳定剂对疫苗的质量及其稳定性情况的影响。

发明内容

为了克服现有预防水痘手段的不足，提供一种安全有效的预防水痘的手段，本发明公开了一种水痘减毒活疫苗。

本发明通过如下技术手段达到发明目的：

一种水痘减毒活疫苗，按如下方法制备而成：

(1)将MRC-5细胞在细胞瓶中连续传代不超过33代；

(2)至细胞生长至一定规模后，将毒种接种至细胞中，进行两次连续感染，M.O.I分别为0.001～0.002和0.01～0.03；

(3)加入含2～3％胎牛血清的MEM培养液，置于35～37℃培养；

(4)当MRC-5细胞病变程度达到++～+++时，倒去培养液，以PBS洗液洗涤细胞表面，洗去牛血清；

(5)加入0.05％的EDTA溶液洗脱感染细胞，将细胞悬液收集于离心管中，在4～8℃下以1800rpm离心5分钟，弃上清，加入含有稳定剂的疫苗液，混匀，收集，吸样做单瓶无菌检测，-80℃冻存；

(6)将单瓶无菌检测合格者，移入超声瓶中进行超声破碎，超声波频率30KHz，0.1～0.2秒/ml，以1000rpm离心10分钟，收集上清，即为病毒原液；

(7)将病毒原液合并、稀释成半成品，吸样进行无菌检测，并立即进行分装、冻干，即得到水痘减毒活疫苗。

所述的水痘减毒活疫苗，制备方法第(5)步中所加入的稳定剂配方如下：