[发明专利]棘刺锚参抗肿瘤因子、其组合物及制备方法和应用

说明书

技术领域：

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种棘刺锚参抗肿瘤因子、其组合物及制备方法和应用。

背景技术：

海洋棘刺锚参(protankyra bidentata)为一种海洋棘皮动物；呈细圆筒状，外形象蠕虫，无管足和疣足，触手12个，每个触手上端有两对指状小枝，体壁内的骨片为锚和锚板；生长于海洋潮间带的粗泥沙到水深15米的泥底，体呈肉红色。棘刺锚参在我国沿海均有生长，蕴藏量极大。它性咸寒，含丰富的蛋白质，味极鲜美，有滋阴降火、补虚清肺、降血压、消肿止痛、防癌等功效，有较高药用和食疗价值。

我国多种本草记载海洋棘刺锚参可用于痈疮毒肿，具有消肿止痛、敛疮生肌等功效。现代医学研究表明海洋棘刺锚参中含有丰富的多种蛋白水解酶，此外未见有其它研究报道。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是公开一种具有抗肿瘤活性的棘刺锚参抗肿瘤活性因子(protankyra bidentata anti-tumor factor，简称PBATF)、其组合物及其制备方法和应用。

本发明公开的PBATF是以棘刺锚参为原料，采用抽提、盐析、离子交换层析、分子筛层析、HPLC步骤分离纯化得到的具有抗肿瘤活性的蛋白质，其分子量为38000道尔顿。

本发明还包括药物组合物，其含有本发明所述的PBATF和药学可接受的载体。

另一方面，本发明公开了PBATF制备方法，包括下列步骤：

a)新鲜海洋棘刺锚参用3～5倍体积的含NaCl、EDTA的磷酸缓冲溶液匀浆抽提；

b)抽提液高速离心后，上清液用硫酸铵分级沉淀，得到硫酸铵饱和浓度介于40％～60％之间的组分；

c)离子交换层析，用含0～1mol/L NaCI的10mmol/L的PB缓冲液进行线性梯度洗脱，收集0.45mol/L～0.65mol/L NaCl梯度活性组分；

d)浓缩后进行分子筛层析，得到三个洗脱峰，收集活性峰；

e)进行HPLC层析，收集活性峰，浓缩冻干后即得。

本发明所述的磷酸缓冲液(PB)可选用10mmol/L PB或其它浓度的磷酸缓冲液，其中含有1～5mmol/L的EDTA，1～2mol/L的NaCl。

本发明所述的离子交换层析的介质可选用DEAE-Sepharose CL6B、DEAE-Sephadex A 50等阴离子交换剂。

本发明所述的分子筛层析介质可选用Sephadex G-75、SephadexG-100、Sephadex G-150、Sephacryl S-300、Sephacryl S-200等。

本发明所述的活性峰可用参考实施例中细胞生长抑制试验等方法鉴定。

在另一方面，本发明还公开了PBATF在制备治疗肿瘤药物中的应用。

本发明还包括治疗肿瘤的方法，所述方法包括给需要治疗的哺乳动物施用含有有效量PBATF，以治疗或改善肿瘤疾病。

本发明PBATF抗肿瘤效果非常明显，能够非常显著抑制肿瘤细胞的生长和繁殖，非常显著抑制体内肿瘤的生长，且未见明显的毒副作用。棘刺锚参的抗肿瘤活性成分的相关研究，国内外未见报道，其提取得率较高(1‰)，具有极高的开发价值，有望成为新型的、疗效显著的抗肿瘤药物。

附图说明：

图1 PBATF制备的DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析图谱。

图2 PBATF制备的Sephacryl-300分子筛层析图谱。

图3 PBATF的HPLC图谱。

图4 PBATF的SDS-PAGE图谱。

图5 PBATF的反相HPLC柱分析。

图6 PBATF的紫外吸收光谱测定。

具体实施方式：

下文将进一步详细讨论本发明的多个方面。

本文所用术语“药物可接受载体”指的是任何无毒的固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、胶囊材料或配制助剂。

本文所用术语“非肠道”指的是包括静脉内、肌内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和灌注的给药模式。

可以方便地以单位剂量形式提供配制剂，可通过药学领域众所周知的任何方法制备所述配制剂。所述方法包括使PBATF与构成一种或多种辅助成分的载体联合的步骤。一般说来，通过使活性成分与液体载体或经细分的固体载体或这两者均匀和密切地混合，然后，必要时使产品成形即可制备出配制剂。