[发明专利]红鳍东方鲀的育种方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水产养殖鱼类——红鳍东方鲀(Takifugu Rubipes)的育种方法，尤其涉及利用微卫星DNA多态性标记进行遗传选育的方法。

背景技术

红鳍东方鲀(Takifugu Rubipes)分布于日本北海道以南和中国台湾省以北之间，是一种味道极为鲜美的海洋性鱼类。近年因资源衰竭而导致捕获量减少，养殖和放流逐渐成为维持资源丰度的重要手段。近几年在我国北方地区包括辽宁大连、山东烟台、河北秦皇岛等地区开始了规模化养殖，大部分产品都出口日本，深受国际市场尤其是日本市场的欢迎，是我国出口创汇的高档水产品之一。日本有关红鳍东方鲀养殖技术的研究开始于1957年。1963年，山口县开始设立种苗生产中心和养殖场，并于1965年开始放流人工苗种。此后，各地纷纷设立生产机构，养殖量和流放量激增。到1994年，全国放流种苗达234.4万尾，养殖用苗达1314万尾。我国2002年红鳍东方鲀年成品鱼产量约4000吨，养殖产量已接近河豚消费大国日本(红鳍东方鲀集约化网箱养殖技术，《中国水产》，2003，(11)：60～62)。目前红鳍东方鲀的出口量很大，产值较高，养殖业者较为青睐。

目前，我国养殖鱼类的育种技术主要采用的是杂交育种和群体选育两种技术方案。红鳍东方鲀的育种在日本做了一些研究工作(Fisheries and StockManagement of Ocellate Puffer Takifugu rubripes in Japan.Tokyo：Koseisa，1997，16-27)，我国养殖使用的鱼苗大部分是从日本商业购进的。国内虽然已有红鳍东方鲀国家级原良种场，但直至目前为止，还没有育出品种的报道和申请良种的信息的公布，即使是常规育种方法的育成品种也未见报道。

采用上述这些传统的育种方法，由于育种前不清楚选育对象的遗传组成，很容易产生近亲交配，并引起目前常见的经济性状和生产性能下降的遗传衰退现象。近年来，分子标记辅助育种技术在水产动物的遗传选育中得到越来越多的应用，然而多数仅仅是利用分子标记来分析和描述育成品种的遗传特征，还未见利用分子标记检测亲本的遗传组成来指导品种培育的完整的技术方案。郝君等对红鳍东方鲀的微卫星DNA多态性进行初步分析(红鳍东方鲀微卫星DNA多态性初步分析，(上海水产大学学报，2006.1，第15卷第1期：21-24)，但并未具体指出利用该微卫星多态性标记的分析结果指导亲本1对1配组繁殖的具体技术方案。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用微卫星多态性分析结果来指导红鳍东方鲀遗传育种的方案。

本发明所述的红鳍东方鲀的育种方法包括如下步骤：

①根据表型性状选择用于繁殖的亲本红鳍东方鲀：

对研究对象的每个亲本进行表型性状测定，对感兴趣的主要数据，比如体长、体重等进行统计分析，根据大于或小于平均值+2倍标准差的原则舍去偏离值较大的个体；除了可数可量数据外，外观与体型等不可量化的表型也是取舍的重要指标，本领域的技术人员可进行相关取舍。

②利用微卫星标记对亲本DNA进行检测，统计分析并计算出个体之间的相似性和遗传距离：

与其它分子标记相比，微卫星DNA在多态性、群体平均杂合度以及群体间遗传距离等方面具有较高的微卫星位点值，因此，微卫星作遗传标记尤其适于检测个体间的差异。本发明也正是利用微卫星标记在检测个体间差异上的这种优势进行红鳍东方鲀种质的选育。

对步骤①所选定的亲本红鳍东方鲀进行基因型分析，本发明所使用的30对微卫星标记的DNA序列及其适用退火温度如表1：

表1

(续表1)

分析获得的电泳图可以用标记数字化软件处理成下一步软件接受的数字(也可人工阅读成数字)代表的基因型数据；所得基因型数据经亲缘关系分析软件获得每个个体的遗传结构参数。

③根据个体问的遗传距离指导亲本1对1的配组繁殖，配组原则是遗传距离大的配在一组：

更具体地，配组原则是雌雄问距离大于0.15的从大到小配组，即先选取遗传距离大的配在一组，至0.15止，低于0.15的作为无法配组的个体或淘汰或与其他群体的亲本配组。

④子代繁殖及培育：

配组的亲本经繁殖获得子代视网箱大小将所有配组的子代放在同一网箱或分网箱按正常河豚鱼养殖技术进行养殖。