[发明专利]来自冷冻的脐带组织的活细胞

权利要求书

1.用于从冷冻的脐带组织回收活细胞的方法，包括步骤：

1)获得低温保存的脐带组织，其中脐带组织已通过包括下述步骤的方法得以制备：

a)获得包含活细胞的脐带组织，

b)将脐带组织与含有含血清细胞培养基和低温防护剂的低温防护溶液组合，和

c)对组合物进行冷却处理，其中组合物在容许低温防护剂渗入组织的时间和温度下作为液体被冷却，

d)冷冻所冷却的组合物以提供冷冻的组织，并任选地接着

e)在低温条件下保存所冷冻的组织；

2)使冷冻的脐带组织解冻；

3)处理解冻的脐带组织以用水置换低温防护剂；以及

4)从这样处理的脐带组织中回收活细胞。

2.用于保留存在于脐带组织中的细胞的存活力的方法，包括步骤：

a)获得包含活细胞的脐带组织，

b)将脐带组织与含有含血清细胞培养基和低温防护剂的低温防护溶液组合；

c)对组合物进行冷却处理，其中组合物在容许低温防护剂渗入组织的时间和温度下作为液体被冷却，

d)冷冻所冷却的组合物，并任选地，接着

e)在低温条件下保存所冷冻的组合物。

3.根据权利要求1或2的方法，其中低温防护剂为DMSO。

4.根据权利要求1或2的方法，其中细胞培养基为胎牛血清。

5.根据权利要求1或2的方法，其中低温防护溶液按体积计包含5-25％DMSO和75-95％胎牛血清。

6.根据权利要求5的方法，其中低温防护溶液是10％DMSO和90％胎牛血清。

7.根据权利要求1-6任一项的方法，其中脐带组织是具有包含祖细胞的血管周围脐带胶质的脐带血管或其片段。

8.根据权利要求7的方法，其中脐带组织是人脐带组织。

9.根据权利要求7或8的方法，其中脐带组织基本上不含有血液。

10.根据任一前述权利要求的方法，其中在约4C下进行至少20分钟的冷却处理。

11.根据任一前述权利要求的方法，其中在约-70C下进行冷冻处理。

12.根据任一前述权利要求的方法，其中在约-196C下进行低温保存。

13.根据权利要求1和3-12任一项的方法，其中在约37C下进行解冻处理。

14.根据权利要求1和3-13任一项的方法，其中通过在约4C下浸没于水或缓冲液中处理解冻的脐带。

15.根据权利要求1和3-14任一项的方法，其中回收自保存的脐带的活细胞为人脐带血管周围细胞。

16.根据权利要求15的方法，其中通过消化脐带胶质回收活细胞。

17.以低温保存状态存在并包含能以存活状态回收的祖细胞的脐带组织，其通过根据权利要求2-14任一项的方法所制备。

18.根据权利要求17的脐带组织，以包含多个容器和注明每个容器内含物的目录的组织库形式存在，其中每个容器包含所述脐带组织的样品。

19.根据权利要求17或权利要求18任一项的脐带组织，其中脐带组织为具有包含祖细胞的血管周围脐带胶质的脐带血管或其片段。

20.从冷冻的脐带组织回收活HUCPVCs的方法，包括步骤：

1)获得低温保存的脐带组织，其中脐带组织为具有缔合的血管周围脐带胶质的新鲜的、分离的人脐带血管或其片段，并已通过包括下述步骤的方法得以制备：

a)获得所述脐带组织，

b)将脐带组织与含有含血清细胞培养基和DMSO的低温防护溶液组合，

c)对组合物进行冷却处理，其中组合物在容许DMSO渗入组织的时间和温度下作为液体被冷却，

d)冷冻所冷却的组合物，和

e)在低温条件下保存所冷冻的组合物一段时间；并接着

2)使保存的脐带组织解冻；

3)处理解冻的脐带组织以用水置换DMSO；以及

4)消化与保存的血管缔合的脐带胶质以释放活HUCPVCs。