[发明专利]一种从乌骨鸡中提取黑色素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及黑色素的提取方法，具体的说，涉及一种从乌骨鸡中提取黑色素的方法。

背景技术

乌骨鸡是我国特有的珍禽，具有特殊的滋补和药用价值。在《本草纲目》里，李时珍说“乌骨鸡，有白毛乌骨者、黑毛乌骨者、斑毛乌骨者，有骨肉皆乌者、肉白乌骨者，但观鸡舌黑者，则骨肉俱乌，入药更良”。可见古代医学在辨别乌骨鸡的药用效果时，是以其肉、骨中的黑色素多少为重要标准的。现代医学也认为乌骨鸡的药用价值在于其体内的黑色素物质。黑色素是一种复杂不规律的多聚体，广泛存在于许多生物体和组织中。动物性来源的黑色素是在黑色素体中合成的，而黑色素体是由分布在皮肤或其它组织中的黑色素细胞产生的。黑色素细胞产生两种截然不同的黑色素类型，一种是棕黑色的真黑素，一种是红褐色的棕黑素。国内外大量实验证明黑色素能通过许多种不同的方式来有效的保护生物有机体，例如黑色素对紫外线的吸收、对重金属离子的鳌合作用、清除自由基以及抗氧化功能等等。由于其特殊性质，黑色素已经被广泛地应用于医学、药理学、化妆品以及其它的领域。

根据黑色素来源的不同，获得黑色素的方法也不尽相同，例如使用化学合成的方法、酸液提取的方法、碱液提取的方法以及微生物合成的方法等等。然而到目前为止没有一个公认的提取纯化黑色素的标准方法。随着对乌骨鸡黑色素的医学以及药理学等方面研究的深入，迫切需要建立快速、廉价、保真的提取方法，从乌骨鸡中高效率地提取黑色素。

到目前为止，提取乌骨鸡中黑色素的方法主要有两种：1)刘望夷在1979年使用盐酸降解蛋白质的方法分离乌骨鸡黑色素。主要的过程是：先将乌骨鸡的样本切成碎块，用浓盐酸浸泡，重复多次，所得滤渣用6M盐酸回流加热，时间为300小时左右，收集沉淀，用蒸馏水和丙酮洗涤干燥。缺点是热盐酸回流的时间太长，容易破坏和改变黑色素的化学结构和微观形态；2)蔡华珍等人在2005年使用的酶法水解蛋白质分离乌骨鸡黑色素。主要过程是：先将乌骨鸡样本绞碎，然后用酸性蛋白酶作为水解酶，加酶量3.8％，控制pH＝2.8、酶解温度34.8℃，时间约为20小时，收集沉淀，用醚、蒸馏水反复洗涤，干燥得黑色素。优点是基本不会破坏黑色素的形态和结构，提取黑色素的损失小。缺点是成本高，酶解条件复杂，步骤繁琐，提取黑色素的时间长。

发明内容

本发明的目的在于克服已有乌骨鸡中提取黑色素技术的缺陷，从而提供一种步骤简单、快速、高保真、低成本的黑色素提取方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供了一种从乌骨鸡中提取黑色素的方法，包括将乌骨鸡切碎后用盐酸溶液清洗，浸入液氮0.5～5分钟后提取。

乌骨鸡切碎后优选用1～10M的盐酸溶液清洗5～30分钟。

浸入液氮后的提取优选为将浸入液氮后的乌骨鸡粉碎成60～100目粉末，转入索氏提取器中，用1～10M的盐酸溶液热回流1.5～3小时，即可停止，浸提液冷却至0～5℃析出沉淀，沉淀中先加入与浸提液等体积的丙酮脱脂洗涤3～4遍，然后加入与浸提液等体积的蒸馏水洗涤3～4遍，干燥即得。

其中在进行索氏提取时，所用的盐酸溶液量没有严格规定，能满足回流条件既可。加入的丙酮和蒸馏水的量与加入的盐酸溶液量相同。

本发明所述的从乌骨鸡中提取黑色素的方法与现有的技术相比，其优点是：通过液氮冷冻后粉碎的方法，在不改变黑色素物理化学性质的前提下，能充分有效的破坏组织中黑色素细胞的结构，有利于黑色素的快速释放，减短了提取黑色素所用的时间。具体来说，相比于刘望夷的盐酸降解蛋白质法，热盐酸回流的时间从原有的300小时缩减为1.5-3小时，也减少了盐酸对黑色素结构的破坏作用，保持了乌骨鸡黑色素近乎完整的形态结构。相比于蛋白酶法，优点是降低了成本、减短了提取所需的时间、操作比较简单。

附图说明

图1液氮粉碎、匀浆组织冰冻切片比对观察黑色素颗粒释放的效果图。

图2纯化后的乌骨鸡黑色素的EPR波谱。

图3纯化后的乌骨鸡黑色素SEM/TEM图像。

图1中，A为液氮粉碎后冰冻切片；B为组织匀浆后冰冻切片。

图3中，A为100um尺度上纯化后乌骨鸡黑色素的SEM图像；B为1um尺度上纯化后乌骨鸡黑色素的SEM图像，图中的颗粒状物体就是黑色素颗粒；C为200nm尺度上观察的纯化后的乌骨鸡黑色素的TEM图像，图中的细微粒是氨基酸。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：