[发明专利]直接分析植物组织切片化学成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学成分分析技术领域，属于植物组织切片化学成分的直接分析方法。

背景技术

对于中药化学成分的研究，传统的方法是采用溶剂分配和柱色谱方法将其逐一分离为纯的单一化合物，然后进行结构鉴定。有效成分的分离主要靠色谱法，如气相色谱、高效液相色谱等。(陈耀祖，陈绍瑗。中药现代化研究的化学法导论，科技出版社，北京2003年，5-6)。应用这种方法，很多中药成分得以阐明。这一技术在中药化学成分的研究上取得了丰硕成果，但这样的分离分析由于步骤多、分离效率低、自动化程度低，一方面比较费时，另一方面由于每一步的操作都会损失化合物，这样对微量组分分析常十分困难。并且在提取分离过程中加热和酸碱处理都可能造成化合物结构的改变。近年来，随着分离分析技术的发展，高效液相色谱技术与NMR和MS联用技术得到广泛应用，实现了对植物化学成分在线分离分析。相对于传统的分离分析方法节省了时间。但是此种方法也必须经过对化学成分的提取，也有可能由于超声，加热，酸碱处理造成化合物结构的改变。川乌和草乌均是中国常用中药，目前，国内常采用酸水渗漉(李正邦等，天然产物研究与开发：Vol.9(1)，1997，9-14)或乙醇(丁立生等，天然产物研究与开发：Vol.6(3)，1994，50-54)提取乌头属植物中生物碱。由于各类生物碱具有不同极性，所以一种溶剂很难提取完全。并且用酸水渗漉法提取得生物碱不全面，脂类生物碱收率较低。近来有研究用不同溶剂体系进行硅胶柱层析(刘淑莹等，专利申请号：200410010819.2)；或乙醇冷浸后，用酸水处理，再用硅胶柱层析得到乌头属植物中脂类生物碱，利用电喷雾电离-质谱分析(刘淑莹等，专利申请号：200410010820.5)。以上提取方法都不能同时对多种不同种类生物碱进行分析。文献报道利用电喷雾串联质谱分析附子中生物碱用乙醇冷浸48小时(Wang，RapidCommun.Mass Spectrom.16，2002，2075-2082)，用时较长。对于马钱子的研究，利用溶剂提取，柱层析，NMR技术已经分离鉴定了多个化合物(蔡宝昌等，药学学报：29(1)，1994，44-48)，近年来色谱和质谱技术被广泛用于分析马钱子中生物碱，如高效液相色谱(HPLC)(Young H.，J.Ethnopharmacol.，2004，93：109-112)毛细管电泳色谱质谱联用技术(CE-MS)(Feng H.，Journal of Chromatography A.，2003，1014：83-91)。对于防己也多采用溶剂提取分离，柱层析等方法分离鉴定(肖崇厚等，中药化学，上海科学技术出版社，146-147)。这些方法都必须首先利用各种溶剂对植物有效成分进行提取，然后进行分析。大多样品需求量较大，灵敏度较低而且需要繁琐的鉴定过程。并且对于微量成分或稳定性差的成分的鉴定分析较困难。

发明内容

本发明的目的是公开一种直接分析植物组织切片化学成分的方法，无需费时较长，且可能破坏化学成分的样品预处理，可以直接快速分析植物化学成分，利用这一方法达到快速分析植物化学成分，特别是分析微量成分；快速鉴别药材真伪；对植物所含化学成分进行预测给出分子量等应用。

为达到上述目的，本发明的技术解决方案是提供一种直接分析植物组织切片化学成分的方法，其包括步骤：

S1、将待检植物切成10-20μm厚的切片，将切片放到基质辅助激光解析飞行时间质谱仪的靶上；

S2、用移液器将基质溶液加到植物组织切片上，用量为≤30μl/cm²；

S3、将靶和点有基质溶液的组织切片，放到真空干燥器中，干燥后待测；

S4、将干燥后的靶和待检植物组织切片，放入基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪进行直接分析，用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱测定，方法是：在切片上顺时针选取10个点，每个点采集30次，累加10个点采集的数据为测定质谱图，即可得到植物切片所含化学成分的信息。

所述直接分析植物组织切片化学成分的方法，其所述待检植物，为川乌、草乌、马钱子或防己的植物组织切片。

所述直接分析植物组织切片化学成分的方法，其所述基质溶液的配制，是用50∶50的乙腈/0.1％三氟乙酸液体，将α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA、α-cyano-4-hydroxycinnamic acid)配成饱和溶液备用。

所述直接分析植物组织切片化学成分的方法，其所述饱和溶液，是含有≤30mg/ml的α-氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)溶液。