[发明专利]甾体化合物分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的甾体化合物分析方法，尤其是涉及[17α，16α-d]噁唑啉甾体化合物以及其合成涉及的一些中间体的分析方法。

背景技术

[17α，16α-d]噁唑啉甾体化合物是非常有用的一类甾体活性化合物，代表药物有地夫可特。地夫可特是第三代糖皮质激素甾体抗炎药，是泼尼松龙的噁唑啉衍生物，主要用于类风湿性关节炎，肾病综合症、系统性红斑狼疮、眼色素层炎、结节病的治疗及器官移植。文献Drugs Res.30(II)，Nr，9(1980)提到地夫可特抗炎活性明显强于泼尼松龙，文献Drugs50(2)：317-313，1995提到，在风湿性关节炎治疗中地夫可特与氢化泼尼松或六甲强龙一样有效，在儿童的慢性关节炎治疗中此药与泼尼松相当。

[17α，16α-d]噁唑啉甾体化合物最早在20世纪60年代由意大利Gruppo Lepetit公司开发得到。其分析方法的相关报道，主要有地夫可特的分析方法。简单介绍如下：

文献Sci.Pharm.，64(2)，225-244(German)1996.里提到：使用反相高效液相色谱来分析地夫可特，使用Hypersil色谱柱。流动相：水∶甲醇＝(60～0)∶(40～100)(体积比)。此方法可以用来分析39种甾体化合物。

文献J.Chromatogr.Sci.，35(9)，439-445(English)1997里提到：使用反相高效液相色谱来分析地夫可特，使用Hypersil色谱柱。流动相：磷酸(PH＝3)∶乙腈＝60∶40(体积比)。

文献J.Chromatogr.，B：Biomed.Sci.Appl.，724(1)，53-63(English)1999里提到：使用高效液相色谱来分析地夫可特，使用Hypersil  (250mm×3.2mm I.D.)C18色谱柱，流速0.5ml/min。流动相：十二烷基磺酸钠加有机溶剂，有机溶剂可选自四氢呋喃，丙醇和丁醇。

文献Journal of Liquid Chromatography&Related Technologies，26(13)，2141-2156(English)2003里提到：使用反相高效液相色谱，流动相为：乙腈∶甲醇∶0.067KH ₂PO₄＝27∶20∶53(体积比)，加上紫外光谱分析，可以用来分析原材料，药品以及人体血浆中的地夫可特。

文献Journal of Liquid Chromatography&Related Technologies，27(12)，1915-1924(English)2004里提到：使用高效液相色谱来分析地夫可特中的杂质方法，其流动相为：0.025M磷酸钠缓冲液加入乙腈/水中(PH＝6.9)，使用液相色谱微预柱(Hypersil ODS)。

传统文献上的方法虽然可以用来分析地夫可特，但是适用性范围比较窄，有的甚至仅限于分析地夫可特，而不能分析其中间体，造成对反应过程中的变化无法进行有效监督。在实际的合成工作中，我们通过研究，对地夫可特的合成工艺进行了研究，研制出一条新的工艺路线。为了了解这条工艺路线中的各个中间体的含量和变化过程，监控反应过程，需要一种适用性很广泛的分析方法，比如在ZL200610129276.5提到的合成[17α，16α-d]噁唑啉甾体化合物以及其合成涉及的一些中间体，需要做系统分析比较，即合成路线上涉及到的中间体以及成品，尽量能够使用同一个液相分析方法处理，这样便于科研试验分析比较，加快科研进度。而目前的方法尚无法解决该问题。

发明内容

针对[17α，16α-d]噁唑啉甾体化合物以及合成涉及的一些中间体系统分析方法问题，本发明提供了一个全新的地夫可特液相分析方法，该方法能够系统分析[17α，16α-d]噁唑啉甾体化合物以及其合成涉及的一些中间体的高效液相方法。方法如下：

照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈和醋酸铵溶液为流动相。

测定过程：取测试样品适量，精密称定，加乙腈溶解并用乙腈稀释制成一定浓度Ca的溶液，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取测试样品的对照品适量，精密称定，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得到该样品的液相含量C％。

C％＝Aa/As×Cs/Ca×100％

Aa为测试样品液相主峰面积；As为测试样品的对照品液相主峰面积；