[发明专利]磁性聚氨酯泡沫塑料固定化细胞降解菊酯农药的方法

权利要求书

1.一种利用磁性植物源聚氨酯泡沫塑料固定不动杆菌属JCX22D菌株细胞进行菊酯农药降解的方法，其特征如下：

1).保藏号为：CGMCC 1793的不动杆菌属JCX22D菌株对数生长期细胞的制备接一环斜面保存的不动杆菌属JCX22D菌株到含10-20mL液体LB培养基的100mL三角瓶中，28℃、180rpm摇床培养12小时；培养好的菌体细胞按1％的接种量转接入含200-400mL液体LB培养基的1L三角瓶中，28℃、180rpm摇床培养至对数生长期(培养液OD₆₀₀值0.8-1)。

8000RPM离心2分钟，收集菌体，无离子灭菌水洗菌体三次，洗涤好的菌体细胞4℃冰箱保存。

2)植物源聚氨酯泡沫塑料液化单体的制备

取玉米芯、甘蔗渣等植物材料，洗净，烘干，粉碎成粉末。

以浓硫酸为催化剂、乙二醇为反应介质、在聚乙二醇(PEG-400)中液化植物原料。

PEG400、乙二醇和浓硫酸按100∶20∶5的质量配比组成的复合液化试剂。

按100mL复合液化试剂加入20-25g植物粉末原料的比例，将液化试剂和植物原料转移到装有搅拌器和冷凝器、预先在恒温至160℃的三颈瓶中，在搅拌和回流的条件下，反应1小时，反应结束后立即转移到冷水中，冷却至室温，调pH至中性。

3)磁性聚氨酯泡沫塑料合成及JCX22D菌株细胞固定

4℃冰箱保存的菌体细胞用10mL灭菌水充分悬浮，加入3g磁性材料Fe₃O₄

100份中和的液化单体、40份交联剂ZS-1618A、1份表面活性剂硅油8404、1份催化剂二乙烯二胺、1份催化剂辛酸亚锡、10nL发泡剂(悬浮菌体细胞和磁性材料的水)充分搅拌预混合后，加100份异氰酸酯以2400r/min的搅拌速度搅拌10～15s后，迅速注入模具中，在室温下自由发泡.常温固化一周。

固定化JCX22D菌株的磁性聚氨酯泡沫塑料修剪成6×2×1cm的小块。

4)固定化JCX22D菌株的磁性聚氨酯泡沫塑料块置于加50mg/L菊酯农药的无机盐培养基中，28℃温浴24小时。

所述的无机盐培养基(1000mL)：K₂HPO₄ 0.2g；KH₂PO₄ 0.8g；MgSO₄ 0.2g；CaSO₄.2H₂O 0.1g；NaM₀O₄.2H₂O0.0033g；FeSO₄.7H₂O 0.005g；(NH₄)₂SO₄ 1g；pH7.2。

2.根据权利要求1所述，JCX22D菌株细胞是用发泡性聚氨酯塑料泡沫塑料固定，有磁性；该固定化细胞可用于高效氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、联苯菊酯、二嗪磷、甲基对硫磷、辛硫磷、毒死蜱阿维菌素农药的生物降解，以及这些农药污染的水体、土壤及农产品的生物修复和生物净化；固定化细胞可经外加磁场收集。