[发明专利]一个促进癌细胞凋亡的shRNA及其用途

说明书

技术领域

本发明属于分子遗传学领域，涉及一个能通过RNA干扰途径特异降低细胞内Hgrc-1基因表达量的发夹型小干扰RNA(命名为shHGRC-1)的序列；以及利用这种发夹型小干扰RNA(shRNA)对Hgrc-1基因进行特异性干扰后引起细胞凋亡的作用，尤其是引起乳腺癌细胞系(MCF-7)调亡的作用；本发明还涉及到该发夹型RNA在杀伤乳腺癌细胞、诱导癌细胞凋亡方面的用途。

背景技术

Hgrc-1基因是通过对某先天性静脉畸开肥大综合征(KTS)病例染色体平衡易位点附近进行EST筛查时发现的一个新的非编码RNA基因，在胎儿和成人的心、肝、脾等多种组织中均有持续广泛的表达。该基因位于8号染色体长臂，全长873bp(见附图1)，经分析没有长的读码框，是一个以RNA起作用的基因。该基因可能早期血管的发生与生成有关系，可能会影响细胞的增殖与凋亡。

RNA干扰技术(RNA interference，简称RNAi)是通过小分子双链RNA(dsRNA)特异性互补靶向基因转录本，从而诱导基因转录后沉默的一种技术。人工合成或细胞内转录生成的小的双链RNA(siRNA)或者发夹型RNA(shRNA)进入细胞后，能和与之互补的靶基因信使RNA结合，从而介导特异性的切割酶将信使RNA降解，达到降低目的基因表达的目的。RNA干扰的效应的关键在于靶基因序列的选取，不同位点的选取，其效果差异很大。这种高度序列特异性使其能够专一特异地降低某一基因的表达。已证实，RNA干扰可单独或与其他现有的治疗手段一同用于疾病的治疗，如抗病毒感染、肿瘤治疗等。(参考文献(1)Andrew Fire，atal，Potent and specificgenetic interference by double-strandedRNAin Caenorhabditis elegans，Nature 391，806-811.(2)Carolyn Napoli，Introduction of a Chimeric Chalcone Synthase Geneinto Petunia Results in Reversible Co-Suppression of HomologousGenes In trans The Plant Cell，Vol.2，279-289，)

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进癌细胞凋亡的shRNA及其用途，该shRNA能够促进癌细胞凋亡，本发明还提供了该shRNA的用途。

本发明提供的一种促进癌细胞凋亡的shRNA，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID No.1所示，即5’-GGAUCAGACA GAGCCAUGUUCAAGACGCAUGGCUCUCUCUGAUCC-3’。

该shRNA可以应用于抑制癌细胞增殖的药中。

本发明提供了一种可以特异性抑制人Hgrc-1基因表达的发夹型干扰RNA(shHGRC-1)。该发夹型干扰RNA具有以下序列：5’-GGAUCAGACAGAGCCAUGUUCAAGACGCAUGGCUCUCUCU GAUCC-3’(SEQ ID No.1)针对靶序列是Hgrc-1RNA序列中为AAGGAUCAGACAGAGCCAAUG(SEQ ID No.2)的序列。本发明还提供了编码该shRNA的DNA序列，以及包含该编码序列的质粒，利用该质粒可以直接在细胞中，或者在体外生成shHGRC-1。本发明还证明了该发夹型干扰RNA(shHGRC-1)在进入人乳腺癌细胞系中后，Hgrc-1表达量被降低，经流式细胞术PI单染检测细胞周期和细胞凋亡，并发现细胞凋亡增加，细胞周期没有明显改变。这说明shHGRC-1在下调了乳腺癌细胞中Hgrc-1基因的表达后，会癌细胞的凋亡，可以起到杀伤癌细胞的作用，具有潜在的治疗癌症的价值。

附图说明

附图1显示Hgrc-1基因的基因组结构和差异剪接方式；

附图2显示通过RT-PCR验证人各种组织和不同细胞系中Hgrc-1的表达，(a)为胃组织、脑组织和胃癌组织的表达，(b)MCF-7和HELA细胞的表达，(c)主动脉、静脉和血细胞的表达，(d)胎儿心脏和肾脏等组织的表达；

附图3显示RNA干扰质粒的构建；

附图4显示RNA干扰MCF-7细胞Hgrc-1后其表达量(图中干扰质粒子3为本发明中pGenesil-1-Hgrc-1质粒)；