[发明专利]谷氨酸脱氢酶诊断试剂盒及谷氨酸脱氢酶活性浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种谷氨酸脱氢酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定谷氨酸脱氢酶活性浓度的方法，属于医学检验测定技术领域。

背景技术

谷氨酸脱氢酶是一种主要存在于细胞线粒体基质中的酶，以肝脏含量最高，其次为肾脏、胰腺、脑、小肠粘膜及心脏等器官。据报道，肝脏中的谷氨酸脱氢酶浓度是心肌中的17倍，骨骼肌的80倍，胰腺的28倍。由于谷氨酸脱氢酶的肝脏特异性，外周血中酶活性的改变在一定程度上可反映肝脏功能的变化，故被认为是肝损害的一个敏感指标。目前血清谷氨酸脱氢酶的测定主要采用连续监测法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)技术，连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定谷氨酸脱氢酶活性浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的谷氨酸脱氢酶诊断试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行谷氨酸脱氢酶活性浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明谷氨酸脱氢酶活性浓度测定方法原理如下：

这种方法应用谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase；EC 1.4.1.2；EC 1.4.1.3)酶促反应连续监测法。谷氨酸脱氢酶酶解酮戊二酸酯反应，同时将还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)氧化成为辅酶(在340nm处没有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度下降的速度，通过测量340nm处吸光度下降的速度，可以测算谷氨酸脱氢酶的活性浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明谷氨酸脱氢酶诊断试剂较为理想：

缓冲液                   100mmol/L

稳定剂                   50mmol/L

还原型辅酶               0.25mmol/L

氯化氨                   30mmol/L

2-酮戊二酸酯             20mmol/L

本发明的谷氨酸脱氢酶诊断试剂盒可以是单剂，包括：

缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、2-酮戊二酸酯、氯化氨。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、还原型辅酶。

试剂2

缓冲液、2-酮戊二酸酯、氯化氨。

还原型辅酶、2-酮戊二酸酯、氯化氨在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、。

试剂2

缓冲液、2-酮戊二酸酯。

试剂3

缓冲液、氯化氨。

还原型辅酶、2-酮戊二酸酯、氯化氨在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

无论是单剂、双剂还是三剂，本发明测定谷氨酸脱氢酶活性浓度的方法，其还原型辅酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一种。

具体实施方式

下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。

实施例一

本实施例的谷氨酸脱氢酶诊断试剂为单试剂，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液             100mmol/L

稳定剂                                    50mmol/L

还原型辅酶                                0.25mmol/L

氯化氨                                    30mmol/L

2-酮戊二酸酯                              20mmol/L

试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净水，复溶后使用。