[发明专利]厚叶石斑木的培养细胞和使用该细胞培养其组织的方法

说明书

                           技术领域

本发明涉及培养细胞和组织培养方法，具体而言，本发明涉及厚叶石斑木的培养细胞以及使用所述培养细胞进行厚叶石斑木(Rhapiolepis umbellata Thunb.)的组织培养方法。

                           背景技术

近来，已着重研究了高等植物的组织培养，并且大量培养植物的叶、茎、根等组织的技术也受到公众的关注。当将切下的植物块种植在琼脂上或含有营养素的液体中时，从该植物块的切割边缘长出大量的细胞，称之为愈伤组织。

通常，不同组织(如根和叶)的细胞分别有着不同的形状和功能。这是细胞生长过程中逐渐分化产生的结果。但是，愈伤组织持续生长而不分化。

一般说，必须播种或种植切片以繁殖植物。此外，土壤和环境在很大程度上影响植物的生长。但是，愈伤组织的培养并不受这些因素改变的影响。另外，愈伤组织比普通的植物体生长得快。当将能促进萌芽或生根的激素或化学物质加到愈伤组织时，可以获得完整的植物体。

如同这种愈伤组织培养方法一样，树木如白杨树和桉树的组织培养方法也是周知的。

但是，已建立的组织培养方法仅仅限于如白杨树和桉树这类树木。一个原因是其它种类的植物难于生长或生根，除非使用适当的激素等物质。

厚叶石斑木属于蔷薇科，是种植在道路中间分隔带等处的路边树。厚叶石斑木能强烈地抵抗公共污染，并具有耐盐性。为了保证和快速地提供这种具有强大的抵抗公共污染能力的植物，组织培养方法是有效的。但是，目前还没有建立稳定地大量繁殖厚叶石斑木的方法。

                           发明内容

本发明的一个目的是提供培养细胞和组织培养方法，这可建立稳定的大量繁殖和转化厚叶石斑木的系统。

为了达到上述目标，发明者已反复进行了艰苦的研究，找出了适合诱导厚叶石斑木愈伤组织的形成和再分化的条件，最终发现了本发明所述的培养细胞和组织培养方法。

本发明的培养细胞分化能力高，通过在含有其量能有效诱导形成厚叶石斑木愈伤组织的苄基腺嘌呤和萘乙酸(NAA)的培养基中培养该植物的一部分组织而获得。

在本发明较佳的厚叶石斑木培养细胞的实施例中，厚叶石斑木组织选自苗端、茎、叶、胚胎细胞和根。

在本发明另一较佳的厚叶石斑木培养细胞的实施例中，厚叶石斑木组织是得自经消毒的厚叶石斑木种子生长得到的幼苗的植物体的组织。

在本发明又一较佳的厚叶石斑木培养细胞的实施例中，厚叶石斑木组织是播种厚叶石斑木后2周内获得的组织。

在本发明又一较佳的厚叶石斑木培养细胞的实施例中，厚叶石斑木组织是厚叶石斑木的种子无菌生长得到的组织。

在本发明的又一较佳的厚叶石斑木培养细胞的实施例中，培养基是WP培养基或MS培养基。

本发明厚叶石斑木的组织培养方法包括：在含有其量能有效诱导厚叶石斑木愈伤组织形成的苄基腺嘌呤和萘乙酸(NAA)的培养基中传代培养上述任一种培养细胞，从而获得厚叶石斑木的小植株。

在本发明较佳的厚叶石斑木的组织培养方法的实施例中，培养基是WP培养基或MS培养基。

本发明的培养细胞是厚叶石斑木的培养细胞，分化能力高，通过在含有其量能有效诱导厚叶石斑木愈伤组织形成的苄基腺嘌呤和萘乙酸(NAA)的培养基中培养该植物的一部分组织而获得。通常情况下，依照下面组织培养方法的过程得到小植株：(1)愈伤组织的形成；(2)多胚层体的形成；(3)多胚层体的再分化和(4)小植株的形成。厚叶石斑木组织培养采取这种形成过程。在此，术语“多胚层体”指大量的其中有细胞分化的枝条。

下面将解释本发明的厚叶石斑木培养细胞和组织培养方法。

虽然并不具体限制厚叶石斑木的组织，但是可以列的是茎、叶、根、茎尖、根尖、胚胎细胞等组织。优选是茎、叶、根、茎尖、胚胎细胞和根尖。

厚叶石斑木的组织可以是成熟的厚叶石斑木树。较佳的是，该组织得自播种厚叶石斑木后得到的相对幼龄的细胞组织。例如，播种厚叶石斑木后2周，更佳是少于9-10天获得的组织。

厚叶石斑木的种子可在培养基中无菌发芽和生长。并不具体限制切片的消毒处理，例如，可通过用乙醇等处理该组织一些时间或数小时、用次氯酸钠处理一些时间或数小时、用无菌水洗涤而实现上述消毒处理。较佳的是，使用暗处用4-10℃的水泡至少1-3夜的种子。