[发明专利]一种快速高效提取植物类胰岛素的方法

说明书

苦瓜(Momordica charanctia)是葫芦科植物，其果是我国人民常用蔬菜，具有清火明目、解毒等功能，其种子含有较丰富的植物类胰岛素，是目前治疗糖尿病的一种有效的天然植物成分。根据植物类胰岛素分子量在27～32K道尔顿等电点在pH值9.0～9.5之间和在酸性环境下的醇溶性，设计出一种高效快速分离提取方法。

1、苦瓜种子去壳后粉碎过60～100目筛；

2、将过60～100目筛的苦瓜籽粉，加入5倍体积的90％乙醇，用盐酸或醋酸等调节溶液pH值在2.0～3.0之间，搅拌0.5～1.0小时；

3、离心(依据离心机型号，一般在4000～5000rpm，10～20分钟)；

4、弃沉淀，取上清液加入5％NaCl(体积重量比)用NaOH或KOH将溶液调为pH值在7.0～7.5，静止1小时；

5、离心(依据离心机型号，一般在4000～5000rpm，10～20分钟)；

6、弃上清，沉淀用丙酮洗三次以上，真空干燥得到植物类胰岛素精品；

7、将上述精品溶于0.1M Tris.cl溶液中，采用亲和胶蓝方法纯化收集，洗脱峰，丙酮或乙醇浓缩干燥得精品。

实施例：

过60～80目筛的苦瓜籽粉200g，加入1000ml的90％乙醇进行萃取，用5Mol/LHCL盐酸或冰醋酸调节溶液到pH值2.0～3.0，搅拌0.5～1小时，静止后离心，(美国Beckman JA25离心机，转速5000rpm，20分钟)。取上溶液加入重量体积比为5％的氯化钠，然后用1～5Mol/L NaOH或KOH将溶液调节为pH值为7.0～7.5。此时溶液变浑浊，静止1小时后离心，用20分钟转速5000rpm。弃上液，将沉淀部分用丙酮洗三次，真空干燥，可得到3.21g的植物类胰岛素精品。将上述样品用0.1M Tris.cl溶解，用经过0.5mmol/L磷酸盐(pH值7.0)洗脱平衡得亲和胶蓝琼脂Blue-dextran-agarose进行开放式亲和吸附30分钟，用同样的0.5mmol/L磷酸盐(pH值7.0)缓冲液进行洗脱三次，每次20～30分钟；然后用含有0.5mmol/L KCL或Nacl的上述磷酸盐(pH值7.0)缓冲液洗脱，收集洗脱出来的峰值物，用丙酮浓缩洗涤，真空干燥，即得到从苦瓜提取出来的植物类胰岛素精品约1.82g。其样品的紫外吸收光谱及二阶导数光谱见附图。