[发明专利]检测和杀伤上皮癌细胞的方法

说明书

相关申请

本申请是未决的国际申请PCT/US00/05387的部分继续，国际申请于2000年2月28日递交，名称为“检测和杀伤上皮癌细胞的方法”。

发明领域

本发明涉及检测上皮癌的方法。

本发明的另一方面是涉及选择性杀伤上皮癌细胞的方法。

在更进一步的方面，本发明涉及在正常细胞存在的情况下检测上皮癌细胞和/或选择性杀伤这种细胞的方法，其中癌细胞线粒体在足够长的时间内保留线粒体标记剂，以识别和/或杀伤这种细胞。定义

本文使用的下列术语具有所指出的含义：

“癌”或“癌性的”细胞在广义上使用，包括入侵的癌细胞，原位癌细胞和严重发育异常的细胞。

“线粒体标记剂”意指一种化合物，其被活的癌细胞的线粒体选择性地吸收，并选择性地在癌细胞中保留足够的时间，使得识别和/或杀伤癌细胞，或使癌细胞丧失能力。

“杀伤”细胞意指或者引起细胞死亡、凋亡，或者引起细胞不能繁殖和转移的改变。

“加合物”意指线粒体标记剂和癌症化学治疗剂的共价或非共价反应产物。

“佐剂”意指是线粒体标记剂，其与其它化学治疗剂结合，协同地或通过与其他试剂的加和作用，使杀伤癌细胞的能力提高。

发明背景

使用选择性“染色”因发育异常，过度增生，肿瘤发生和其它活性表面损伤引起的异常组织的染料组合物，检测恶性和癌变前上皮损伤或癌瘤的体内诊断方法是本领域已知的。这些诊断方法使用将癌性底物染色的染料，癌性底物在可见光下是可检测到的，或使用将底物染色的荧光染料，当用可见光谱以外波长的光照射时，底物是可检测到的。

例如，在Chenz，中国口腔病学杂志(27：44-47(1992))和Filurin(口腔病学(俄罗斯)72：44-47(1993))中公开了使用荧光素和荧光素衍生物的方法。这些方法包括使用染料，接着在紫外光下检查，以检测选择性发出荧光的癌/癌变前组织。另一种现有技术的方法包括用甲苯胺蓝漂洗上皮，接着通过普通的视觉检查检测任何选择性染色的组织。这种方法已被公开，例如在Burkett(美国6,086,852)，Tucci(美国5,372,801)和Mashberg(美国4,321,251)的专利中公开。以类似的方式使用其它噻嗪染料和恶嗪染料在Pomerantz的美国专利5,882,627中公开。

迄今为止，已经建立理论，认为这种染料选择性“标记”癌性组织是因为染料保留在癌性组织细胞间相对较大的间隙空间中，而不能有效地透过正常组织较紧密的细胞内连接，或选择性地保留在这种相对较小的空间中。

与甲苯胺蓝因选择性保留在癌细胞间相对较大的间隙中，从而选择性标记癌上皮组织的看法相反，这种阳离子染料，例如若丹明、荧光素、恶嗪和噻嗪染料(包括甲苯胺蓝)和其它阳离子超活体标记剂选择性染色上皮组织的机制是，标记剂在癌细胞线粒体中被选择性吸收和选择性保留。这种选择性的线粒体吸收和保留明显是由于与正常细胞线粒体相比，癌细胞线粒体的较高电位(在膜内侧上的负电荷)。参见，例如Chen等，癌细胞1/改变的表型，75-85(冷泉港实验室，1984)；Lampidis等，癌症研究43，716-720(1983)。事实上，超活体阳离子染料和其它超活体阳离子标记剂对癌细胞的选择性标记和在癌细胞线粒体中的保留与癌细胞的一种特性有关，该特性看来是造成癌细胞快速克隆生长和转移能力的原因，即，癌细胞线粒体的较高电位是细胞能量的来源，是细胞产生ATP(三磷酸腺苷)的驱动力。

发明概述

我们现已发现一种通过选择性标记癌上皮细胞线粒体而在体内检测癌上皮细胞的方法。

另一方面，我们发现一种在正常细胞存在的情况下选择性杀伤癌细胞的治疗方法。

我们的检测方法包含下列步骤，将阳离子超活体线粒体标记剂递送至上皮(其包含正常的和癌性的细胞)可疑癌性部位位点的组织，从而引起所述标记剂被吸收并选择性保留在癌细胞的线粒体中。然后通过任何适宜的方法检测癌细胞，例如，在可见光或所选择的不可见光下，进行仪器或视觉检查。

在又一实施方案中，标记剂被线粒体吸收后，在可疑癌性部位的位点使用漂洗试剂，从而提高标记剂自正常细胞线粒体释放的速度，进而增加诊断方法的选择性。