[发明专利]一种多肽——氢化酶－9.46和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——氢化酶-9.46，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

氢化酶是一种促进氢的可逆性活化作用的酶，这种催化作用广泛发生在原核生物，也发生于一些真核生物中。氢化酶对于硫酸盐还原的细菌和其它一些类型的细菌的厌氧代谢非常重要。它促使氢分子起双向活化反应，常规上，它们的活性由氢分子产物、氢分子利用、或2H2-H+的交换企图决定。氢化酶结构的不同暗示着在细胞的新陈代谢作用中不同的氢化酶可能反映不同。这个特性显示：结构的不同是整修氢化酶反应于代谢需要的基础。

在各种不同的生物体内存在各种类型的氢化酶，但是它们都似乎至少包含一个铁硫磺丛。它们能被广义的分成两组：包含有镍和在一些情况下同时包含有硒的氢化酶([NiFe]and[NiFeSe]氢化酶)，还有那些缺少镍的氢化酶([Fe]氢化酶)。

[NiFe]and[NiFeSe]氢化酶是由包含有一个信号肽的小亚单位和一个大亚单位组成。所有已知的大亚单位似乎与进化有关：它们含有两个Cys-x-x-Cys结构域，一个在它们的N-末端尽头，另一个在它们的C-末端尽头。这四个半胱氨酸与镍的粘合物有关。在[NiFeSe]氢化酶中C-末端基序的第一个半胱氨酸是硒代半胱氨酸，它已经用实验方法证明是一个镍配体。我们已经揭露了两个以Cys-x-x-Cys结构域为中心的模式。

产碱杆菌(Alcaligenes eutrophus)拥有一个NAD-诱导的细胞质的氢化酶(hoxS)；这种酶由四个亚单位组成。其中两个亚单位(β和δ)负责氢化酶反应，以及进化上与膜结合氢化酶的大小亚单位有关。

来自古细菌纲产烷生物的辅酶F-420氢化酶(EC 1.12.99.1)(FRH)的α亚单位也属于这个家族。氢化酶蛋白家族的所有成员的氨基酸序列中均具备如下所示的序列片断：R-G-[LIVMF]-E-x(15)-[QESM]-R-x-C-G-[LIVM]-C和[FY]-D-P-C-[LIM]-[ASG]-C-x(2，3)-H(其中的两个半胱氨酸残基是镍配基)。

根据氨基酸同源性比较的结果，本发明的多肽与氢化酶的结构和功能具有相似性，都含有氢化酶家族特征性的保守序列，与人体新陈代谢密切相关，其结构的异常可能会导致人体内代谢的紊乱。因此，认为此蛋白是一种新的氢化酶，并命名为氢化酶9.46。

由于如上所述氢化酶-9.46蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的氢化酶-9.46蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新氢化酶-9.46蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——氢化酶-9.46以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码氢化酶-9.46的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码氢化酶-9.46的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产氢化酶-9.46的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——氢化酶-9.46的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——氢化酶-9.46的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与氢化酶-9.46异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中1790-2050位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-2475位的序列。