[发明专利]一种多肽——人肢体蛋白－47.96和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人肢体蛋白-47.96，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

内侧肢体多指(趾)畸形(PPD)是一种常见肢体缺陷，这一遗传性缺陷在脊椎动物包括人和鼠中都有报道。对一些患有显性PPD的家族的连锁分析表明导致肢体异常包括并指(趾)和三指(趾)骨拇指的基因主要定位于人染色体7q36。(Heutink et al.1994 Genet.6：287-292)在鼠类最主要的肢体畸形是半肢外指(趾)畸形(Hx)和锤骨指(趾)(Hm)，它们定位于一同源染色体，且紧密连锁(Sweet，H.O.1982 Mouse New Lett.66：66)。

肢体基因1(Lmbrl)是鼠类锤骨指(趾)畸形关键位点上的基因之一。其5’端外显子的选择性转录会分别产生32个氨基酸和490个氨基酸的产物，ATG，TGA和TAA以及pA分别是其启始密码子、终止密码子和两个选择性的多聚腺苷酸化位点。该基因与人C7orf2有超过95％的相似性。其编码的肢体蛋白1可能含有九个跨膜结构域，没有信号序列，其N-端在胞浆内，C-端面向腔内。在人类，定位于7q36的PPD关键位点含有许多与鼠锤骨指(趾)具有相似性的基因，包括C7orf2、C7orf3、HLXB9等。

研究显示在半肢外指(趾)畸形突变鼠，肢体基因1的编码序列并没有被破坏，但在突变鼠的肢体胚芽的不同发育阶段该基因的表达水平却有所改变，表明肢体基因1的表达水平与肢体形态学异常有明显关联，且有理由认为半肢外指(趾)畸形与肢体基因1的一个调节等位基因突变有关(Richard M.Clark etal.2000 Genomics 67，19-27)。

本发明的人的基因与鼠肢体基因1在蛋白水平上有94％的同一性和97％的相似性。基于以上各点，故认为本发明的新蛋白为人肢体蛋白，命名为人肢体蛋白-47.96。并以此推断其与鼠肢体蛋白1相似，同为肢体蛋白家族的成员，并具有相似的生物学功能。

由于如上所述人肢体蛋白-47.96蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人肢体蛋白-47.96蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人肢体蛋白-47.96蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人肢体蛋白-47.96以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人肢体蛋白-47.96的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人肢体蛋白-47.96的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人肢体蛋白-47.96的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人肢体蛋白-47.96的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人肢体蛋白-47.96的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人肢体蛋白-47.96异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少95％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中18-1328位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-3011位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。

本发明还涉及一种能与本发明多肽特异性结合的抗体。